| 基于pDS132的基因敲除中创伤弧菌氯霉素的耐药性变化及影响 |
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| 引用本文： | 凤梓涵,王静,金虹,辛文文,康琳,王菁,高姗,李岩伟,袁媛,王景林.基于pDS132的基因敲除中创伤弧菌氯霉素的耐药性变化及影响[J].微生物学通报,2021,48(8):2632-2642. |
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| 作者姓名： | 凤梓涵 王静 金虹 辛文文 康琳 王菁 高姗 李岩伟 袁媛 王景林 |
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| 作者单位： | 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所 北京 100071;中国农业大学动物医学院 北京 100193;中国人民解放军疾病预防控制中心 北京 100071 |
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| 摘 要： | 【背景】基于自杀载体的基因敲除在单基因敲除上的应用较为常见,但在多基因敲除过程中细菌耐药性的变化及对后续敲除的影响尚未明确。【目的】探究基于自杀载体pDS132的创伤弧菌vvhA与rtxA1双基因敲除株构建过程中,创伤弧菌对氯霉素耐药性的变化及对后续基因敲除的影响。【方法】基于自杀载体pDS132的同源重组法构建创伤弧菌YJ016的单基因敲除株YJ016-ΔvvhA、YJ016-ΔrtxA1和双基因敲除株YJ016-ΔvvhAΔrtxA1,记录单交换筛选时的氯霉素浓度与筛选平板上成功重组的菌株所占比例。琼脂稀释法测定野生型与敲除株的氯霉素最低抑菌浓度(Minimum InhibitoryConcentration,MIC)和抗性突变频率,纸片扩散法测定菌株对其他药物的敏感性,分析其对单交换筛选的影响。【结果】单基因敲除株的氯霉素MIC及氯霉素抗性突变频率高于野生型;双基因敲除株的庆大霉素抑菌圈直径小于野生型。单基因敲除时,单交换重组菌株的占比为100%(20/20);在YJ016-ΔvvhA上敲除rtxA1基因,氯霉素筛选浓度为2、4μg/mL时,单交换重组菌株的占比分别为40%(8/20)、5%(1/20);在YJ016-ΔrtxA1上敲除vvhA基因,氯霉素筛选浓度为2、4μg/mL时,单交换重组菌株的占比均为0%(0/20)。【结论】基于自杀载体pDS132的基因敲除中创伤弧菌氯霉素的耐药性升高,可能影响后续单交换重组的筛选,该结果为基于自杀载体的同源重组技术应用于多基因敲除提供了参考。
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| 关 键 词： | 创伤弧菌 自杀载体 同源重组 基因敲除 耐药性 |
| 收稿时间： | 2020/10/23 0:00:00 |
Changes and effects of chloramphenicol resistance of Vibrio vulnificus in gene knockout with Pds132 |
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| FENG Zihan,WANG Jing,JIN Hong,XIN Wenwen,KANG Lin,WANG Jing,GAO Shan,LI Yanwei,YUAN Yuan,WANG Jinglin.Changes and effects of chloramphenicol resistance of Vibrio vulnificus in gene knockout with Pds132[J].Microbiology,2021,48(8):2632-2642. |
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| Authors: | FENG Zihan WANG Jing JIN Hong XIN Wenwen KANG Lin WANG Jing GAO Shan LI Yanwei YUAN Yuan WANG Jinglin |
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| Institution: | Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China;College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China;Chinese PLA Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vibrio vulnificus suicide vector homologous recombination gene knockout drug resistance |
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