阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶的基因克隆及重组酶性质分析 |
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引用本文: | 夏立亮,侯巍,王保学,刘华,高伟,蒋琴,李鑫,于源华.阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶的基因克隆及重组酶性质分析[J].中国生物工程杂志,2010,30(5):6-10. |
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作者姓名: | 夏立亮 侯巍 王保学 刘华 高伟 蒋琴 李鑫 于源华 |
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作者单位: | 1.长春理工大学生命科学技术学院 长春 130022
2.中国人民解放军第208医院 长春 130021
3.长春卫尔赛生物药业有限公司 长春 130616 |
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摘 要: | 为研究重组阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶的活性,从阴道毛滴虫提取RNA,经过RT-PCR克隆蛋氨酸γ-裂解酶基因,与pET-15b质粒连接构建原核表达载体pET-15b-mgl1,并测序。转化宿主菌BL21后进行诱导表达,分离纯化目的蛋白并研究其酶学性质。以L-蛋氨酸、DL-同型半胱氨酸、L-半胱氨酸为底物测定重组酶Km值为0.318、2.14、1.62mmol/L,比活性分别为20.17、318.69、56.96μmol/min/mg protein。MGL最适pH在5.0到6.0之间,在50℃可稳定30min无活性损失。实验结果显示重组酶具有较高的活性和较好的热稳定性,为临床应用研究奠定基础。
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关 键 词: | L-蛋氨酸γ-裂解酶 抗癌剂 同型半胱氨酸血症 基因克隆 阴道毛滴虫 |
收稿时间: | 2010-01-11 |
修稿时间: | 2010-03-01 |
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