| RNA干扰茄病镰刀菌ALP基因及其基因沉默菌株的制备 |
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| 引用本文： | 梁涛,刘珂凤,何宏,赵桂秋,王婷,喻文倩.RNA干扰茄病镰刀菌ALP基因及其基因沉默菌株的制备[J].中国真菌学杂志,2013,8(1):10-13,19. |
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| 作者姓名： | 梁涛 刘珂凤 何宏 赵桂秋 王婷 喻文倩 |
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| 作者单位： | 1. 青岛大学医学院附属医院眼科,青岛,266003
2. 青岛大学医学院附属医院检验科,青岛,266003 |
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| 摘 要： | 目的构建RNA干扰质粒载体抑制茄病镰刀菌碱性丝氨酸蛋白酶(ALP)基因,通过检测ALP的表达及酶活性变化筛选出基因沉默菌株。方法构建2个ALP的干扰载体,转化茄病镰刀菌孢子,获得ALP基因沉默菌株△ALP1、△ALP2,通过RT-PCR检测△ALP1、△ALP2的ALP基因mRNA变化,并通过蛋白琼脂廓清率培养基检测ALP酶活性变化,对所得菌株的毒力进行判断。结果 RNA干扰后所获基因沉默菌株中,ALP的mRNA表达量显著低于标准茄病镰刀菌株(F=184.67,P<0.01),其中ΔALP2抑制效果较好、酶活性显著低于标准菌株及△ALP1(q=5.276、5.463,P<0.01)。结论通过LiAc转化法对茄病镰刀菌ALP进行RNA干扰,可有效抑制茄病镰刀菌ALP的表达;ALP基因沉默茄病镰刀菌株的获取,为进行动物体内实验、深入研究ALP在茄病镰刀菌性角膜炎发病机制中的作用、探索新型治疗方法提供思路。
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| 关 键 词： | 茄病镰刀菌 真菌性角膜炎 丝氨酸蛋白酶 RNA干扰 |
The study of inhibiting the expression of ALP in Fusarium solani by RNA interference and establishing the gene-silenced strains |
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| LIANG Tao
,
LIU Ke-feng
,
HE Hong
,
ZHAO Gui-qiu
,
WANG Ting
,
YU Wen-qian.The study of inhibiting the expression of ALP in Fusarium solani by RNA interference and establishing the gene-silenced strains[J].Chinese JOurnal of Mycology,2013,8(1):10-13,19. |
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| Authors: | LIANG Tao LIU Ke-feng HE Hong ZHAO Gui-qiu WANG Ting YU Wen-qian |
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| Institution: | 1(1.Department of Ophthalmology,Affiliated Hospital of Medical College of Qiingdao University,Qingdao 266003;2.Department of clinical laboratory,Affiliated Hospital of Medical College of Qiingdao University,Qingdao 266003) |
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| Abstract: | |
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