Tmem119基因敲入荧光示踪工具小鼠的构建及表型验证

目的]通过将tdTomato基因片段插入到Tmem119基因终止密码子位置建立了Tmem119-tdTomato工具小鼠模型，并对该小鼠进行表型验证。方法]制备Tmem119 sgRNA、Cas9 mRNA和donor vector,利用CRISPR/Cas9技术通过显微注射共同注射到C57BL/6小鼠受精卵中，通过交配及基因型鉴定获得F1代阳性小鼠；通过荧光检测验证小鼠Tmem119蛋白在大脑各区域的表达情况。结果]基因型检测结果表明，tdTomato表达片段成功插入到Tmem119基因终止密码子前；免疫荧光检测结果表明，tdTomato蛋白荧光在小胶质细胞内与经典标记蛋白Iba1荧光重叠，与星形胶质细胞标记蛋白GFAP不重叠。结论]成功构建特异性标记小胶质细胞的红色荧光示踪工具小鼠，为小胶质细胞的动态深入研究提供模式工具。