| 人Dcp1a基因真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的定位 |
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| 引用本文： | 赵雷,王申森,黄映辉,张丽娜.人Dcp1a基因真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的定位[J].生命科学研究,2018(1). |
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| 作者姓名： | 赵雷 王申森 黄映辉 张丽娜 |
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| 作者单位： | 北京工业大学生命科学与生物工程学院; |
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| 摘 要： | 人脱帽酶Dcp1a(human m RNA decapping enzyme 1a)是m RNA降解过程中的重要成员之一,构建其真核表达载体,并对其表达和细胞内定位进行分析,可为进一步研究Dcp1a的功能提供基础。本研究以He La c DNA文库为模板,采用PCR方法扩增Dcp1a c DNA全长序列并克隆到pm Cherry-N1载体。转化大肠杆菌DH5α后,挑取阳性克隆提取质粒,分别进行Xho I/Sal I双酶切及测序鉴定。将重组质粒用Vigo Fect转染试剂转染He La细胞,随后用RT-PCR和Western-blot检测Dcp1a在He La细胞中的表达,并采用激光共聚焦显微镜观察Dcp1a的亚细胞定位情况。通过DNA测序分析证实目的基因Dcp1a的序列完全正确,人Dcp1a基因真核表达载体pm Cherry-N1-Dcp1a构建成功,并在He La细胞中获得表达;激光共聚焦显微镜观察显示Dcp1a蛋白定位在细胞质中,而且He La细胞中过表达Dcp1a在胞质中明显形成了P小体(processing body,P-body)。实验结果为进一步探讨该基因的功能及其与P小体的相关性奠定了基础。
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| 关 键 词： | 人脱帽酶Dcp1a 载体构建 HeLa细胞 细胞定位 P小体 |
Construction of the Eukaryotic Expression Vector for Human Dcp1a Gene and Analysis of Its Cellular Localization in HeLa Cells |
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