| 二硫键形成促进双载体转断裂B区缺失型凝血因子Ⅷ基因 |
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| 引用本文： | 朱甫祥,杨树德,刘泽隆,缪静,屈慧鸽,迟晓艳.二硫键形成促进双载体转断裂B区缺失型凝血因子Ⅷ基因[J].生物化学与生物物理进展,2012,39(2):181-187. |
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| 作者姓名： | 朱甫祥 杨树德 刘泽隆 缪静 屈慧鸽 迟晓艳 |
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| 作者单位： | 鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院;鲁东大学生命科学学院 |
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| 基金项目： | 山东省自然科学基金(ZR2010CM061), 烟台市科技计划项目(2008152), 教育部留学回国人员科研启动基金项目(20071108)和鲁东大学科研基金项目(LZ20083305)资助项目 |
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| 摘 要： | 双载体共转B区缺失型凝血因子Ⅷ(BDD-FⅧ)重链和轻链基因是克服腺相关病毒载体(AAV)容量限制的一种策略， 但重链分泌的低效性产生链不均衡性，影响转基因的功效．假设重、轻链链间二硫键形成可提高双载体转BDD-FⅧ基因的功效，本文将BDD-FⅧ的重链A2区的Met662和轻链A3区的Asp1828突变为Cys．双载体培养的COS-7细胞共转染突变重链和轻链基因，Western blot显示细胞内二硫键交联的重、轻链蛋白形成，ELISA和Coatest分析细胞培养上清的BDD-FⅧ重链分泌量和生物活性，分别为(109 ± 13) μg/L和(0.65 ± 0.12) U/ml，明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞((71 ± 11) μg/L和(0.35 ± 0.05) U/ml)．结果表明，链间二硫键形成可提高双载体转BDD-FⅧ基因的功效，为进一步动物体内运用双AAV载体转BDD-FⅧ基因提供了实验依据．
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| 关 键 词： | B区缺失的凝血VIII因子 双载体 转基因 链间二硫键 |
| 收稿时间： | 2011/6/30 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2011/10/25 0:00:00 |
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