| 含有Rubisco小亚基启动子和转运肽序列的通路克隆入门载体的构建和应用 |
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| 引用本文： | 马莉,宋中邦,胡清泉,赵玥,年洪娟,玉永雄,李昆志,陈丽梅.含有Rubisco小亚基启动子和转运肽序列的通路克隆入门载体的构建和应用[J].生物化学与生物物理进展,2011,38(3):269-279. |
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| 作者姓名： | 马莉 宋中邦 胡清泉 赵玥 年洪娟 玉永雄 李昆志 陈丽梅 |
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| 作者单位： | 昆明理工大学生物技术研究中心，昆明 650224;昆明理工大学生物技术研究中心，昆明 650224;西南大学动物科学与技术学院，重庆 400716;昆明理工大学生物技术研究中心，昆明 650224;昆明理工大学生物技术研究中心，昆明 650224;西南大学动物科学与技术学院，重庆 400716;昆明理工大学生物技术研究中心，昆明 650224;昆明理工大学生物技术研究中心，昆明 650224 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(2007CB108901), 国家自然科学基金(30670163)和云南省中青年学术与技术带头人培养费(2004PY01-5)资助项目 |
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| 摘 要： | Gateway(通路克隆)技术是最近开发出来的一种分子克隆技术,其特点是操作简单、省时高效,已经成功应用于很多基因表达载体的构建.然而,现有的通路克隆植物表达载体不包含任何将表达蛋白定位到叶绿体中的序列.将通路克隆入门质粒载体pENTR-2B的XmnⅠ位点改造成HindⅢ位点,产生入门载体pENTR*-2B,然后将番茄1,5二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)小亚基3C的启动子(PrbcS)及其转运肽序列(*T)和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因亚克隆到pENTR*-2B中,构建通路克隆入门载体pENTR*-PrbcS-*T-GFP.实验结果证实,用pENTR*-PrbcS-*T-GFP和通路克隆的植物表达载体进行LR反应,构建GFP的光诱导型植物表达载体,可以成功地将表达的GFP定位到转基因植物的叶绿体中.利用β-葡糖苷酸酶(GUS)报告基因替代该入门载体中的GFP基因做试验也得到相似的结果.这说明用目的基因替换该入门载体中的GFP可以构建目的基因的入门载体,然后用通路克隆技术可以快速构建其光诱导型植物表达载体,将表达的目的蛋白定位到转基因植物或组织细胞的叶绿体中.
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| 关 键 词： | 通路克隆技术 1 5二磷酸核酮糖羧化酶小亚基3C启动子 入门载体 植物表达载体 叶绿体定位 |
| 收稿时间： | 7/9/2010 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 2010/11/10 0:00:00 |
Construction and application of a gateway entry vector with rubisco small subunit promoter and its transit peptide sequence |
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| MA Li,SONG Zhong-Bang,HU Qing-Quan,ZHAO Yue,NIAN Hong-Juan,YU Yong-Xiong,LI Kun-Zhi and CHEN Li-Mei.Construction and application of a gateway entry vector with rubisco small subunit promoter and its transit peptide sequence[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2011,38(3):269-279. |
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| Authors: | MA Li SONG Zhong-Bang HU Qing-Quan ZHAO Yue NIAN Hong-Juan YU Yong-Xiong LI Kun-Zhi and CHEN Li-Mei |
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| Institution: | Biotechnology Research Center, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650224, China;Biotechnology Research Center, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650224, China;College of Zoological Science and Technology, Southwest University, Chongqing 400716, China;Biotechnology Research Center, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650224, China;Biotechnology Research Center, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650224, China;College of Zoological Science and Technology, Southwest University, Chongqing 400716, China;Biotechnology Research Center, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650224, China;Biotechnology Research Center, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650224, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Gateway technology PrbcS promoter entry vector plant expression vector chloroplast localization |
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