IFN-λ1在HEK293T细胞中表达纯化及活性检测 |
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引用本文: | 连丹花任蕾颖崔晓希邵晓亚李智涛蒙雪琼陈义祥.IFN-λ1在HEK293T细胞中表达纯化及活性检测[J].生物技术,2022(6):677-683. |
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作者姓名: | 连丹花任蕾颖崔晓希邵晓亚李智涛蒙雪琼陈义祥 |
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作者单位: | 1.河南科技大学基础医学院471000; |
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基金项目: | 河南省高等学校重点科研项目(22A310014);河南省科技攻关重点项目(222102310300)。 |
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摘 要: | 目的]构建IFN-λ1真核表达质粒,利用人胚胎肾HEK293T细胞表达系统,获得具有良好生物学活性的IFN-λ1重组蛋白。方法]将IFN-λ1目的基因克隆到pcDNA3.1+载体NheⅠ与XhoⅠ多克隆位点构建pcDNA3.1-IFN-λ1分泌表达质粒,并将其转染到HEK293T细胞中;采用Ni-NTA亲和层析方法分离纯化重组蛋白,SDS-PAGE和蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测IFN-λ1的表达与纯度;采用qPCR、WB结合显微镜观察检测IFN-λ1的生物学活性。结果]IFN-λ1真核表达质粒构建正确,而且能够在HEK293T细胞中分泌表达重组蛋白,分离纯化的IFN-λ1能够有效地诱导ISG15、ISG54、ISG56、OAS1、TNFα、MX1和TRAIL等凋亡相关基因的表达,激活p38促凋亡信号通路,抑制水泡性口炎病毒对BHK-21细胞的感染。结论]成功构建了pcDNA3.1-IFN-λ1真核表达质粒,能够在HEK293T细胞中分泌表达IFN-λ1重组蛋白;分离纯化的IFN-λ1重组蛋白具有潜在的抗肿瘤和抗病毒生物学活性,为进一步研究IFN-λ1的功能和临床应用奠定了基础。
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关 键 词: | IFN-λ1 HEK293T细胞 表达 纯化 生物学活性 |
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