| 乙型肝炎病毒全长PreS蛋白基因在酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 孙明颢,叶林伯,郜金荣,贺石汉,吴正辉. 乙型肝炎病毒全长PreS蛋白基因在酵母中的表达[J]. 中国病毒学, 2003, 18(2): 99-103 |
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| 作者姓名： | 孙明颢 叶林伯 郜金荣 贺石汉 吴正辉 |
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| 作者单位： | 武汉大学生命科学院病毒研究所,湖北武汉,430072 |
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| 基金项目： | 武汉市攻关项目(20026002091) |
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| 摘 要： | 应用直接提取法从武汉地区乙型肝炎病人患者阳性血清中提取HBV基因组,以此作为模板,用引物PCR方法获得全长preS基因,该片段的DNA大小1 203bp.克隆到pUCm-T载体中,应用M13通用引物进行序列测定,与中国HBV标准株序列比较,证实基因型为Adr亚型.有24个核苷酸不同,preS基因包含3个起始密码ATG分别为preS1,preS2,和S的翻译起点.然后将preS基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,将Sal I线性化的pPIC9K-preS质粒用电击法导入巴斯德-毕赤酵母GS115His-中.通过MD-G418平板筛选和5'AOX1和3'AOX1引物PCR鉴定获得稳定重组HBV全长preS基因的His+Mut+酵母工程菌株.此酵母菌株在合适的培养条件和甲醇诱导下高效表达产生全长PreS蛋白并可分泌到培养液中,SDS-PAGE显示培养液中含有分子量约为48kDa的带;微孔ELISIA法证实表达并分泌到培养液中的PreS蛋白能够与HBV抗体阳性血清发生特异性反应.
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| 关 键 词： | HBV preS基因 毕赤酵母表达 ELISA |
| 文章编号： | 1003-5125(2003)02-0099-05 |
| 修稿时间： | 2002-06-10 |
Expression of the Full Length preS Gene of Hepatitis B virus in Pichia pastoris |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ELISA |
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