| 假坚强芽孢杆菌四氢嘧啶羟化酶的晶体制备及X-射线衍射研究 |
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| 引用本文： | 杨江丽,王青青,徐书景,关婉怡,赵宝华,董辉,鞠建松.假坚强芽孢杆菌四氢嘧啶羟化酶的晶体制备及X-射线衍射研究[J].微生物学报,2015,55(11):1468-1474. |
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| 作者姓名： | 杨江丽 王青青 徐书景 关婉怡 赵宝华 董辉 鞠建松 |
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| 作者单位： | 天津科技大学生物工程学院，天津300222,河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050024,河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050024,河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050024,河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050024,中国医学科学院放射医学研究所，天津市分子核医学重点实验室，天津300192,河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050024 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31300601);协和青年基金(33320140186);河北省自然基金项目(C2015205212);河北师范大学重点项目(L2012Z12) |
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| 摘 要： | 摘要:【目的】假坚强芽孢杆菌四氢嘧啶羟化酶蛋白纯化、晶体制备及X-射线衍射研究。【方法】通过PCR从假坚强芽孢杆菌OF4中克隆获得四氢嘧啶羟化酶基因，构建原核表达载体，经过原核表达，采用Ni-NTA亲和层析法和分子排阻色谱法纯化蛋白，289 K下采用座滴法进行晶体筛选和制备，在低温100 K下通过X-射线衍射仪(Rigaku MicroMax-007 HF)收集晶体衍射数据。【结果】通过原核表达及纯化成功获得了适合晶体生长的蛋白BpEctD。通过筛选最终在蛋白浓度为6.5 mg/mL及含有0.2 mol/L MgCl2·6H2O，0.1 mol/L Bis-Tris pH6.5，25% (W/V) 聚乙二醇3，350的缓冲液中获得了理想的蛋白晶体，其大小约为360 μm×240μm×60 μm，并在100K下成功收集了衍射数据，晶体衍射分辨率为2.40，空间群为三斜晶系P1，晶胞参数为a=45.18，b=58.87，c=68.81，α=77.48°，β=86.03°，γ=66.97°，每个不对称单位中含有2 个BpEctD单体，马修斯系数为2.44 3/Da，溶剂含量约为49.53%。【结论】衍射数据的成功收集为假坚强芽孢杆菌OF4四氢嘧啶羟化酶三维结构的解析奠定了前期基础，将有助于阐明四氢嘧啶羟化酶的催化机制。
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| 关 键 词： | 关键词:假坚强芽孢杆菌OF4，四氢嘧啶羟化酶，结晶，X-射线衍射 |
| 收稿时间： | 2015/2/13 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2015/4/13 0:00:00 |
Crystallization and X-ray diffraction of an ectoine hydroxylase from Bacillus pseudofirmus OF4 |
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| Jiangli Yang,Qingqing Wang,Shujing Xu,Wanyi Guan,Baohua Zhao,Hui Dong and Jiansong Ju.Crystallization and X-ray diffraction of an ectoine hydroxylase from Bacillus pseudofirmus OF4[J].Acta Microbiologica Sinica,2015,55(11):1468-1474. |
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| Authors: | Jiangli Yang Qingqing Wang Shujing Xu Wanyi Guan Baohua Zhao Hui Dong and Jiansong Ju |
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