| 慢病毒介导的GFP-Hsp90αE47A 基因在HepG2 细胞表达及对
细胞增殖性影响的研究 |
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| 引用本文： | 尹强兵#,王晓捷#,马晓姣邹飞陈雪梅.慢病毒介导的GFP-Hsp90αE47A 基因在HepG2 细胞表达及对
细胞增殖性影响的研究[J].现代生物医学进展,2011,11(9):1643-1646. |
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| 作者姓名： | 尹强兵# 王晓捷# 马晓姣邹飞陈雪梅 |
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| 作者单位： | 南方医科大学公共卫生与热带医学院职业卫生与职业医学系,广东,广州,510515 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，广东省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:建立真核细胞表达的GFP-Hsp90αE47A基因重组慢病毒载体三质粒包装细胞系统,并检测其对细胞增殖性的影响,为进一步研究HSP90分子伴侣功能奠定基础。方法:制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统:转移质粒(Hsp90αE47A/psin-GFP),包装质粒(ΔNRF)及包膜蛋白质粒(VSV-G)。磷酸钙法将三质粒共转染293T包装细胞,48h后收集病毒上清。将制备好的慢病毒颗粒感染HepG2细胞,在荧光显微镜下观察报告基因GFP的表达情况,Westernblot检测HepG2细胞GFP-Hsp90α表达。MTT法检测细胞增殖情况。结果:转染后的293T和感染后的HepG2细胞能观察到较强的绿色荧光,培养液上清病毒滴度约为3.0×103ifu/μl,HepG2细胞中有GFP-Hsp90α蛋白的表达。内源性Hsp90α表达无明显上升(为对照组的1.05±0.15倍,P<0.05,t检验),有明显外源性GFP-Hsp90αE47A蛋白的表达,为对照组内源性Hsp90α的0.68±0.12倍。外源性GFP-Hsp90αE47A蛋白的表达HepG2细胞增殖活性于第4d有明显抑制。(1.051±0.03vs1.349±0.05,P<0.05,t检验)。结论:成功建立重组慢病毒载体的三质粒包装细胞系统,并将GFP-Hsp90αE47A基因在HepG2细胞中稳定表达,且并未引起细胞明显的热休克反应而导致的内源性Hsp90α增高;且能明显抑制细胞增殖,为后期Hsp90α分子伴侣功能进行研究奠定基础。
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| 关 键 词： | 热休克蛋白90 ATP酶活性 慢病毒载体 绿色荧光蛋白 |
Expression of Recombinant GFP-Hsp90P E47A Gene by Lentiviral Vector
Transfection and Its Effect on Cell Proliferation in HepG2 Cells |
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| YIN Qing-bing#,WANG Xiao-jie#,MA Xiao-jiao,ZOU Fei,CHEN Xue-mei.Expression of Recombinant GFP-Hsp90P E47A Gene by Lentiviral Vector
Transfection and Its Effect on Cell Proliferation in HepG2 Cells[J].Progress in Modern Biomedicine,2011,11(9):1643-1646. |
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| Authors: | YIN Qing-bing# WANG Xiao-jie# MA Xiao-jiao ZOU Fei CHEN Xue-mei |
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| Institution: | (Department of Occupational Health and Occupational Medicine, School of Public Health and Tropical Medicine, South Medical University, Guangzhou 510515) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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