褐飞虱自噬相关基因NlATG13的表达与功能分析

【目的】自噬参与多种细胞生理过程，自噬相关蛋白ATG13是ATG1/13复合物的组成部分, 在启动自噬中发挥着重要作用。本研究旨在分析ATG13在褐飞虱Nilaparvata lugens中发挥的功能，评估其作为害虫防治靶标的潜力。【方法】基于褐飞虱转录组数据，利用RACE克隆褐飞虱NlATG13的cDNA全长序列；应用生物信息学技术分析NlATG13的核苷酸和氨基酸序列特征。利用RT-qPCR检测其在褐飞虱不同发育阶段(1-5龄若虫和雌雄成虫)和不同组织(5龄若虫头、胸、中肠和脂肪体以及刚羽化雌成虫的卵巢)中的表达模式。通过显微注射dsNlATG13至3龄若虫进行RNAi敲减NlATG13的表达，探究其对褐飞虱生存和中肠细胞自噬的影响；利用RT-qPCR检测RNAi 4 d时3龄若虫中糖原合成与代谢通路相关基因NlGSK3, NlGS和NlGP的表达量。【结果】克隆得到NlATG13的cDNA全长序列(GenBank登录号: MF805752)，其开放阅读框长1 203 bp，编码一个含400个氨基酸的蛋白质(GenBank登录号: AWW05678.1)。系统发育分析表明，在纳入分析的物种中，NlATG13蛋白与半翅目温带臭虫Cimex lectularius和茶翅蝽Halyomorpha halys的ATG13蛋白进化关系较为接近。发育表达谱结果表明NlATG13在褐飞虱3和5龄若虫中的表达量显著高于在1-2龄若虫、雌成虫和雄成虫中的； 组织表达谱结果表明NlATG13在5龄若虫头部和脂肪体中的相对表达量较高，在胸部的表达量最低。RNAi结果显示，与dsGFP对照组相比dsNlATG13处理组中褐飞虱中肠细胞中存在明显的糖原颗粒积累，NlGS, NlGSK3和NlGP的表达量均无显著变化，组织ATP含量显著降低；褐飞虱的存活率显著降低，处理第10天时褐飞虱存活率下降到41.4%，而dsGFP对照组的存活率保持在85.6%的较高水平。【结论】 RNA干扰NlATG13基因对褐飞虱的生存和中肠细胞自噬具有显著的抑制效果，NlATG13基因具有作为褐飞虱防治靶标的潜力。

Expression and functional analysis of the autophagy-related geneNlATG13 in the brownplanthopper,Nilaparvata lugens(Hemiptera: Delphacidae)