| NLS-RARα蛋白相互作用蛋白的筛选与验证 |
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| 引用本文： | 王翀,钟 梁,王东生,刘北忠,廖 飞,郝 坡,刘 畅,金丹婷,王春光.NLS-RARα蛋白相互作用蛋白的筛选与验证[J].生物化学与生物物理进展,2009,36(4):500-505. |
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| 作者姓名： | 王翀 钟 梁 王东生 刘北忠 廖 飞 郝 坡 刘 畅 金丹婷 王春光 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆,400016
2. 重庆医科大学重庆市生物化学与分子药理学重点实验室,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30300449), 国家中医药管理局(02-03ZP52) 和重庆医科大学(XBYB2007104, XBYB2007108)资助项目. |
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| 摘 要： | 急性早幼粒细胞白血病(APL)具有特征性染色体易位，产生的PML-RARα融合基因在其发生发展中有重要作用．PML-RARα融合蛋白在细胞内被中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase，NE)切割为PML突变蛋白(核定位信号NLS缺失)和RARα突变体 (NLS-RARα，包含有PML的核定位信号)，这两段蛋白质在APL的发生中可能具有重要作用．为进一步研究NLS-RARα的生物学功能，运用酵母双杂交技术在白血病cDNA文库中筛选与其作用的蛋白质．首先PCR技术扩增NLS-RARα编码序列，克隆至诱饵载体pGBKT7，测序鉴定后将其转化酵母AH109．免疫印迹检测到诱饵蛋白表达后，将含有诱饵载体的AH109与含有白血病cDNA文库的酵母Y187交配，在含有X-α-gal的营养缺陷性培养基上选择和筛选二倍体酵母．经回转实验和测序分析验证得到8个与NLS-RARα相互作用的蛋白质．为进一步验证这些相互作用，克隆其中的JTV-1蛋白，利用间接免疫荧光，GST pull-down和免疫共沉淀技术成功验证了它与NLS-RARα的相互作用．为进一步探讨APL的发生机制提供了新的线索．
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| 关 键 词： | NLS-RARα蛋白 白血病 酵母双杂交 蛋白质相互作用 NLS-RARα protein |
| 收稿时间： | 2008/6/12 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2008/12/25 0:00:00 |
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