| 新型生长快速需钠弧菌基因组无痕编辑体系构建 |
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| 引用本文： | 吴凤礼,梁艳霞,张媛媛,霍亚楠,王钦宏.新型生长快速需钠弧菌基因组无痕编辑体系构建[J].生物工程学报,2020,36(11):2387-2397. |
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| 作者姓名： | 吴凤礼 梁艳霞 张媛媛 霍亚楠 王钦宏 |
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| 作者单位： | 1 中国科学院天津工业生物技术研究所 中国科学院系统微生物工程重点实验室，天津 300308;1 中国科学院天津工业生物技术研究所 中国科学院系统微生物工程重点实验室，天津 300308;2 中国科学院大学，北京 100049;3 天津科技大学 生物工程学院，天津 300457 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31700080)，中国博士后科学基金 (No. 2017M621082)，天津市企业博士后创新项目 (No. TJQYBSH2017006) 资助。 |
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| 摘 要： | 需钠弧菌Vibrio natriegens作为近几年发展起来的一种新型生长快速底盘细胞，在合成生物学领域展现出良好的应用前景。基因组编辑是合成生物学研究中不可或缺的遗传操作手段。但是，开展需钠弧菌的合成生物学研究仍然有待进一步发展精准、高效的基因组编辑系统。针对这个问题，首先对6株需钠弧菌的生理表型进行检测，选取生长快速、表型稳定的CICC 10908菌株作为基因组编辑研究的宿主细胞。其次，建立并优化需钠弧菌自然转化系统。优化后的系统将筛选标记基因cat-sacB或KanR整合到需钠弧菌染色体上的同源重组效率分别达到4×10–5和4×10–4。再次，在优化的自然转化系统基础上，利用双向选择性筛选方法，建立了精准、高效的需钠弧菌基因组无痕编辑体系。通过测试，基因敲除、回补、插入和替换这4种不同类型基因编辑的阳性率分别为93.8%、100%、95.7%和100%。最后，需钠弧菌可以实现质粒的高效转化和消除。该工作为需钠弧菌合成生物学研究提供精准、高效的基因组无痕编辑手段。
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| 关 键 词： | 需钠弧菌，底盘细胞，自然转化，基因组编辑，合成生物学 |
| 收稿时间： | 2020/3/24 0:00:00 |
Construction of seamless genome editing system for fast-growing Vibrio natriegens |
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| Fengli Wu,Yanxia Liang,Yuanyuan Zhang,Yanan Huo,Qinhong Wang.Construction of seamless genome editing system for fast-growing Vibrio natriegens[J].Chinese Journal of Biotechnology,2020,36(11):2387-2397. |
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| Authors: | Fengli Wu Yanxia Liang Yuanyuan Zhang Yanan Huo Qinhong Wang |
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| Institution: | 1 CAS Key Laboratory of Systems Microbial Biotechnology, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China;1 CAS Key Laboratory of Systems Microbial Biotechnology, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China;2 University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China;3 College of Biotechnology, Tianjin University of Science & Technology, Tianjin 300457, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vibrio natriegens chassis natural transformation genome editing synthetic biology |
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