| 大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究 |
| |
| 作者姓名： | 徐卉芳 张先恩 张治平 张用梅 A.E.G.CASS |
| |
| 作者单位： | 1. 中国科学院微生物研究所,北京,100080;中国科学院武汉病毒研究所,武汉,430071
2. 中国科学院武汉病毒研究所,武汉,430071
3. Biochemistry Department, Imperial College of Science, Technology and Medicine, South Kensington, London SW7 2AY, UK |
| |
| 摘 要： | 大肠杆菌碱性磷酸酶（E.coli alkaline phosphatase, EAP, EC 3.1.3.1）是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶. 采用易错聚合酶链反应(error prone PCR)的方法,在原有高活力突变株的基础上,对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化,经两轮error prone PCR,获得催化活力较亲本D101S突变株提高3倍、较野生型酶提高35倍的进化酶4-186,并对该酶的催化动力学特征进行了分析. 进化酶基因的DNA测序表明4-186含两个有义氨基酸置换：K167R和S374C,二者既不位于底物结合位点,也不位于酶的金属离子结合位点.
|
| 关 键 词： | 定向进化 易错聚合酶链反应 大肠杆菌碱性磷酸酶 催化活力 |
| 收稿时间： | 2002-06-07 |
| 修稿时间： | 2002-06-07 |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《生物化学与生物物理进展》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《生物化学与生物物理进展》下载免费的PDF全文 |
|
