| 小鼠XBP1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及筛选 |
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| 引用本文： | 钟河江,蒋建新,王海燕,杨策,张冲,严军,刘庆,黄苏娜.小鼠XBP1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及筛选[J].现代生物医学进展,2009,9(8). |
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| 作者姓名： | 钟河江 蒋建新 王海燕 杨策 张冲 严军 刘庆 黄苏娜 |
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| 作者单位： | 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室,全军交通医学研究所,全军交通伤重点实验室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400042 |
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| 基金项目： | ,国家重点基础研究发展规划(973计划),全军医学科研科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建小鼠XBP1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,筛选具有较好干扰效率的小鼠XBP1 siRNA靶序列.方法:针对小鼠XBP1基因特异性序列,设计4个RNAi靶序列及1个阴性对照序列,合成含有正义和反义Oligo DNA的互补DNA序列,退火形成双链DNA,并克隆到经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切后的pGCL-GFP载体连接产生短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,DNA测序鉴定.由病毒包装系统进行包装,经滴度测定后感染NIH3T3细胞,应用Real-time PCR鉴定干扰效率.结果:PCR鉴定与DNA测序证实合成的寡核苷酸链插入正确,293T细胞测定病毒滴度为1×108TU/ml.Real-timePCR证实XBP1-siRNA-3靶点的干扰效率最高,其干扰效率达到95%以上.结论:成功构建并筛选了小鼠XBP1基因RNAi慢病毒载体,为研究XBP1在巨噬细胞免疫功能调控中的作用奠定了基础.
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| 关 键 词： | RNA干扰 XBP1 慢病毒 |
Construction and screening of lentiviral vector of RNA interference of mouse XBP1 gene |
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| ZHONG He-jiang,JIANG Jian-xin,WANG Hai-yan,YANG Ce,ZHANG Chong,YAN Jun,LIU Qing,HUANG Su-na.Construction and screening of lentiviral vector of RNA interference of mouse XBP1 gene[J].Progress in Modern Biomedicine,2009,9(8). |
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| Authors: | ZHONG He-jiang JIANG Jian-xin WANG Hai-yan YANG Ce ZHANG Chong YAN Jun LIU Qing HUANG Su-na |
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