| 应用Ad Easy腺病毒载体系统构建人肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a) |
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| 引用本文： | 吕茜,魏翠,张清林,王洁,宫海滨.应用Ad Easy腺病毒载体系统构建人肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)[J].现代生物医学进展,2010,10(13). |
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| 作者姓名： | 吕茜 魏翠 张清林 王洁 宫海滨 |
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| 基金项目： | 徐州市科技局社会发展项目，国家自然科学基金资助项目，江苏省自然科学基金项目，江苏省"六大人才高峰"第三批项目(资助类型C)，江苏省医学重点人才 |
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| 摘 要： | 目的:利用Ad easy腺病毒表达系统构建含人肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组腺病毒.方法:将人SERCA2a基因全长c DNA(3700bp)插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,成功构建pAd-TrackCMV SERCA2a重组质粒,经Pme I酶切线性化,采用电击法转入到已含Ad easy质粒的电感受态菌BJ5183进行重组.挑选同源重组质粒,Pac I酶切线性化转染HEK293细胞包装成重组腺病毒颗粒,荧光检测有绿色荧光蛋白表达.将重组病毒和SD大鼠心肌细胞共培养,western-blot检测SERCA2a可以在大鼠心肌细胞过表达且影响了胞内SERCA2a的活性.结果:成功包装含人SERCA2a基因的重组腺病毒,并可以有效感染SD大鼠心肌细胞.结论:利用新型腺病毒载体在短时间内成功构建了携带有人SERCA2a基因的腺病毒,为以后进一步研究人SERCA2a基因治疗提供了新途径.
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| 关 键 词： | Ad Easy腺病毒 人肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a) 转染 |
Construction and Expression of Recombinant Adenovirus Carrying Human Sarco(endo)plasmic Reticulum Ca2+ATPase2a |
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| LV Qian,WEI Cui,ZHANG Qing-lin,WANG Jie,GONG Hai-bing.Construction and Expression of Recombinant Adenovirus Carrying Human Sarco(endo)plasmic Reticulum Ca2+ATPase2a[J].Progress in Modern Biomedicine,2010,10(13). |
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| Authors: | LV Qian WEI Cui ZHANG Qing-lin WANG Jie GONG Hai-bing |
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