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栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质
引用本文:周宏敏,洪宇植,肖亚中,CUI Teng-Jiao,WANG Xiao-Tang,蒲春蕾.栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质[J].微生物学报,2007,23(6).
作者姓名:周宏敏  洪宇植  肖亚中  CUI Teng-Jiao  WANG Xiao-Tang  蒲春蕾
作者单位:安徽大学生命科学学院&现代实验技术中心,合肥 230039;安徽大学生命科学学院&现代实验技术中心,合肥 230039;安徽大学生命科学学院&现代实验技术中心,合肥 230039;佛罗里达国际大学化学与生物化学系,迈阿密FL 33199, 美国;佛罗里达国际大学化学与生物化学系,迈阿密FL 33199, 美国;中国科学技术大学生命科学学院,合肥 230026
基金项目:国家自然科学基金(Nos. 30370045, 30470056和30670069),安徽省优秀青年基金(No. 04043048),安徽省教育厅自然基金重点(No.2006KJ049A),国家863高技术研究与发展计划项目(No. 2007AA09Z421)和安徽大学211创新团队计划(No.02203109)资助。
摘    要:栓菌420(Trametes sp. 420)漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)进行异源表达,产生两种重组漆酶:rLacDx(具有天然N-末端)和rLacDe(N-末端带有8个额外的氨基酸残基)。摇瓶发酵18d,rLacDx和rLacDe的产量分别为1.21×105u/L、7.38×104u/L [以2,2′-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸(ABTS)为底物]。在高密度发酵条件下,rLacDx的产量增加到2.39×105u/L,同时其生产周期降至7.5 d。两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似,且在50℃和pH3~10的范围内均稳定。然而,rLacDx对底物ABTS的比活力(1761u/mg)高于rLacDe (1122u/mg),其表观Km值(427μmol/L)低于rLacDe (604μmol/L)。

关 键 词:异源表达,高密度发酵,漆酶,毕赤酵母,栓菌420

High Output of a Trametes Laccase in Pichia pastoris and Characterization of Recombinant Enzymes
ZHOU Hong-Min,HONG Yu-Zhi,XIAO Ya-Zhong,CUI Teng-Jiao,WANG Xiao-Tang and PU Chun-Lei.High Output of a Trametes Laccase in Pichia pastoris and Characterization of Recombinant Enzymes[J].Acta Microbiologica Sinica,2007,23(6).
Authors:ZHOU Hong-Min  HONG Yu-Zhi  XIAO Ya-Zhong  CUI Teng-Jiao  WANG Xiao-Tang and PU Chun-Lei
Institution:School of Life Sciences & Modern Experiment Technology Center, Anhui University, Hefei 230039, China;School of Life Sciences & Modern Experiment Technology Center, Anhui University, Hefei 230039, China;School of Life Sciences & Modern Experiment Technology Center, Anhui University, Hefei 230039, China;Department of Chemistry and Biochemistry, Florida International University, 11200 SW 8th Street, Miami, FL 33199, USA;Department of Chemistry and Biochemistry, Florida International University, 11200 SW 8th Street, Miami, FL 33199, USA;School of Life Science, University of Science and Technology of China, Hefei 230026, China
Abstract:
Keywords:heterologous expression  high-density fermentation  laccase  Pichia pastoris  Trametes sp  420
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