HPVl6ll基因的克隆及其在真核细胞中的表达

克隆并表达人乳头瘤病毒16型(HPVl6)晚期基因ll,以期为研制防治宫颈癌的DNA疫苗奠定基础。本实验采用PCR方法从质粒p16L1BNl中获得HPVl6ll基因片段,利用基因重组技术,将其克隆至含巨细胞病毒(CMV)启动于的真核表达载体中,核酸序列鉴定HPVl6ll基因真核表达质粒构建成功,再用脂质体介导基因转染7721人肝癌细胞。转化阳性细胞经SDS—PAGE显示在分子量大约为55kDa的位置出现一条特异性条带,与HPVl6ll分子量大小相符。表达产物经Western blotting分析：能与HPVl6L1单克隆抗体特异结合。真核表达质粒pcDNA3—HPVl6L1构建成功并能在真核细胞7721中有效表达,为下一步进行动物DNA免疫实验奠定了基础。