| 复苏促进因子结合蛋白A的原核表达及对耻垢分枝杆菌的促生长作用 |
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| 引用本文： | 师长宏,赵勇,毛峰峰,张海,白冰,江鹰.复苏促进因子结合蛋白A的原核表达及对耻垢分枝杆菌的促生长作用[J].现代生物医学进展,2010,10(11). |
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| 作者姓名： | 师长宏 赵勇 毛峰峰 张海 白冰 江鹰 |
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| 基金项目： | 国家"863"专项项目，国家自然科学基金，陕西省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:在大肠埃希氏菌中表达结核分枝杆菌复苏促进因子结合蛋白A(resuscitation-promoting factor-interacting protein A,RipA),观察该蛋白对耻垢分枝杆菌的促生长作用.方法:采用PCR方法,从结核分枝杆菌H37Rv的DNA中扩增出编码RipA蛋白的Rv1477基因,测序正确后克隆入原核表达载体pProEx HTa,构建重组表达质粒pProEx HTa-RipA.以重组质粒转化大肠杆菌DH5a,筛选阳性重组菌株,经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside IPTG)诱导RipA表达,在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化.将纯化的RipA蛋白加入到耻垢分枝杆菌中,分光光度法测定细菌的A600,观察RipA蛋白的促生长作用.结果:成功扩增了Rv1477基因,并克隆于表达载体pProEx HTa中,经酶切鉴定获得阳性克隆.经诱导在大肠杆菌中表达出相对分子量为52kDa的目的蛋白,Western-blot结果显示该蛋白与6x His单抗有特异性的反应条带.采用Ni+-NTA柱可获得纯化的目的蛋白.10%M的RipA蛋白可显著促进耻垢分枝杆菌休眠菌的复苏和生长.结论:Papa蛋白在大肠杆菌中成功表达,并能有效促进耻垢分枝杆菌的生长.
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| 关 键 词： | 复苏促进因子 结核分枝杆菌 表达 休眠 |
Prokaryotic Expression of Resuscitation-promoting Factor-interacting Protein A and Determination of Its Resuscitation Activity on the Mycobacterium Smegmatis |
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| SHI Chang-hong,ZHAO Yong,ZHANG Hai,MAO Feng-feng,BAI Bing,JIANG Ying.Prokaryotic Expression of Resuscitation-promoting Factor-interacting Protein A and Determination of Its Resuscitation Activity on the Mycobacterium Smegmatis[J].Progress in Modern Biomedicine,2010,10(11). |
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| Authors: | SHI Chang-hong ZHAO Yong ZHANG Hai MAO Feng-feng BAI Bing JIANG Ying |
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