| 基于人ANP32A蛋白的C型流感病毒聚合酶纯化及PB2蛋白单克隆抗体的高效制备 |
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| 引用本文： | 屈玉杏,郭兴,韩佳岐,张振宇,王晓钧.基于人ANP32A蛋白的C型流感病毒聚合酶纯化及PB2蛋白单克隆抗体的高效制备[J].生物工程学报,2022,38(8):3041-3048. |
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| 作者姓名： | 屈玉杏 郭兴 韩佳岐 张振宇 王晓钧 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 马传染病与慢病毒病创新团队, 黑龙江 哈尔滨 150069 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金创新研究群体科学基金(31521005)；国家自然科学基金(31702269,32002275) |
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| 摘 要： | C型流感病毒是感染人的重要呼吸道病原，也可感染猪、狗等动物。聚合酶是C型流感病毒复制的核心，是研究病毒复制机制的重要靶标。然而目前没有商品化针对C型流感病毒聚合酶的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)，一定程度制约了相关研究的开展。为了制备C型流感病毒碱性聚合酶2(polymerase basic protein 2,PB2)的MAb，本研究依据人酸性核磷酸蛋白32A (human acidic nuclear phosphoprotein 32 family member A,huANP32A)与流感病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)相互作用的特性，利用免疫共沉淀技术在真核表达系统中通过融合Flag标签的huANP32A (huANP32A-Flag)纯化并富集C型流感病毒RdRp (PB1、PB2、P3)，并以之作为免疫原免疫BALB/c小鼠，利用间接ELISA与Western blotting方法筛选出6株(7B11-5、8A4-5、13D9-6、8D4-1、8D4-3、9F9-4)能稳定分泌识别PB2 MAb的阳性杂交瘤细胞株。经鉴定7B11-5、8A4-5、8D4-1和8D4-3抗体亚型为IgG1型，13D9-6抗体亚型为IgG2a型，9F9-4抗体亚型为IgG3，轻链均为κ链。进一步选取1株效价高的杂交瘤细胞8D4-1来制备腹水，测定收集的小鼠腹水抗体效价为1︰ 64 000。Western blotting结果显示，制备的MAb能够与C型流感病毒PB2发生特异性免疫反应；激光共聚焦试验结果表明，该MAb可准确检测C型流感病毒PB2的亚细胞定位。本研究通过huANP32A蛋白高效富集了C型流感病毒的RdRp，并以该复合物为抗原制备的PB2 MAb具有较好的特异性，为C型流感病毒聚合酶检测、结构分析及机制研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | C型流感病毒 PB2 huANP32A 单克隆抗体 |
| 收稿时间： | 2022/3/15 0:00:00 |
Purification of influenza C virus polymerase based on huANP32A protein and efficient preparation of monoclonal antibody targeting PB2 protein |
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| QU Yuxing,GUO Xing,HAN Jiaqi,ZHANG Zhenyu,WANG Xiaojun.Purification of influenza C virus polymerase based on huANP32A protein and efficient preparation of monoclonal antibody targeting PB2 protein[J].Chinese Journal of Biotechnology,2022,38(8):3041-3048. |
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| Authors: | QU Yuxing GUO Xing HAN Jiaqi ZHANG Zhenyu WANG Xiaojun |
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| Institution: | Equine Infectious Diseases and Lentiviral Diseases Research Group, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150069, Heilongjiang, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | influenza C virus PB2 huANP32A monoclonal antibody |
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