| 猪圆环病毒2型通过外泌体miR-125a-5p靶向Bcl-2诱导淋巴细胞凋亡 |
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| 作者姓名： | 段滇宁 沈华伟 潘艳敏 冯睿 张霖 陆灵光 刘建奎 邱龙新 陈洪博 |
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| 作者单位： | 龙岩学院 生命科学学院, 福建 龙岩 364012;福建省预防兽医学与生物技术高校重点实验室, 福建 龙岩 364012;龙岩学院 生命科学学院, 福建 龙岩 364012;动物源性人兽共患病防控福建省高校工程研究中心, 福建 龙岩 364012;龙岩学院 生命科学学院, 福建 龙岩 364012;福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室, 福建 龙岩 364012 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(32102628);中央引导地方科技发展专项项目(2019L3011);福建省自然科学基金(2021J01568);大学生创新创业训练项目(S202111312033) |
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| 摘 要： | 为研究miR-125a-5p在猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)诱导淋巴细胞凋亡中的作用及其作用机制,以PCV2感染PK-15细胞外泌体孵育的淋巴细胞为研究对象,采用流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光定量PCR,检测淋巴细胞凋亡率及凋亡相关miRNA表达;合成miR-125a-5p模拟物和抑制物转染PK-15细胞,检测miR-125a-5p过表达或抑制表达后细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p对靶基因的调控;Western blotting检测外泌体孵育淋巴细胞的线粒体凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3的表达。结果显示,感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体极显著提高淋巴细胞凋亡率,在一定浓度范围内呈剂量依赖性;与PCV2诱导细胞凋亡相关的miRNA中,miR-125a-5p表达量极显著升高,miR-125a-5p模拟物转染细胞后极显著提高细胞凋亡率;利用TargetScan预测发现,miR-125a-5p与Bcl-2 3''UTR区有结合位点,miR-125a-5p模拟物极显著抑制pmir-Bcl-2 3''UTR-WT荧光素酶活性,对pmir-Bcl-2 3''UTR-MuT的荧光素酶活性无明显改变;外泌体孵育的淋巴细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、细胞色素C的释放和caspase-3表达量显著升高,Bcl-2/Bax的比值极显著降低。这表明,PCV2通过外泌体诱导淋巴细胞上调miR-125a-5p的表达,进而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白表达,激活淋巴细胞线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。
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| 关 键 词： | miR-125a-5p 猪圆环病毒2型 外泌体 细胞凋亡 |
| 收稿时间： | 2022-03-29 |
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