棉铃虫乙醇脱氢酶原核可溶性表达条件的优化北大核心 |
| |
引用本文: | 艾新宇赵洁王亚美魏原杰刘小宁.棉铃虫乙醇脱氢酶原核可溶性表达条件的优化北大核心[J].生物技术,2017(1):65-70. |
| |
作者姓名: | 艾新宇赵洁王亚美魏原杰刘小宁 |
| |
作者单位: | 1.新疆大学生命科学与技术学院830046; |
| |
基金项目: | 国家自然科学基金项目(“棉铃虫CYP6B6 2-十三烷酮响应转录因子的筛选及其调控机制研究”;No.31471781);自治区青年科技创新人才培养工程(No.qn215yx001) |
| |
摘 要: | 目的]提高棉铃虫乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)在大肠杆菌中可溶性蛋白的表达量。方法]研究了诱导温度和诱导剂IPTG浓度对可溶性His-ADH融合蛋白表达量的影响。设置15℃、20℃、25℃、30℃、37℃五个不同温度和0.2 mmol/L、0.4 mmol/L、0.6 mmol/L、0.8 mmol/L、1.0 mmol/L五个不同的IPTG诱导剂浓度分别进行原核诱导表达。基于SDS-PAGE和灰度扫描来评价可溶性融合蛋白的表达水平。结果]表达的目的融合蛋白相对分子质量约为53 k Da,与预测的分子量大小一致,Western Blot分析表明能与His单克隆抗体特异性结合;可溶性融合蛋白的最佳诱导条件为温度25℃、IPTG浓度0.6 mmol/L。结论]表达优化最终条件为温度25℃(相对表达量为2.21)、IPTG浓度0.6 mmol/L(相对表达量为1.14)。低温有利于可溶性蛋白的形成,诱导剂IPTG浓度并不是越高越好。
|
关 键 词: | 棉铃虫 原核表达 乙醇脱氢酶 条件优化 |
本文献已被 维普 等数据库收录! |
|