| 受精卵注射CRISPR/Cas9系统制备基因编辑子午岭黑山羊技术体系的建立 |
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| 引用本文： | 于鸿浩,朱海鲸,刘锦旺,李陇平,秦剑平,郭小军,张顺,陈生会,屈雷.受精卵注射CRISPR/Cas9系统制备基因编辑子午岭黑山羊技术体系的建立[J].中国科学:生命科学,2018(3). |
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| 作者姓名： | 于鸿浩 朱海鲸 刘锦旺 李陇平 秦剑平 郭小军 张顺 陈生会 屈雷 |
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| 作者单位： | 榆林学院陕西省陕北绒山羊工程技术研究中心;桂林医学院生物技术学院;神木县畜牧兽医技术推广站;桂林医学院附属医院生殖中心; |
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| 摘 要： | 受精卵注射CRISPR/Cas9系统是制备基因编辑动物的有效方法,其中受精卵收集效率、显微注射胚胎存活率及胚胎移植受体妊娠率是关键影响因素.以子午岭黑山羊为研究对象探讨了情期内不同时间点放置CIDR对超数排卵的影响;分析了胚胎供体和受体发情停止时间差异对胚胎移植妊娠率的影响;设计了3个打靶肌肉生长抑制素基因(MSTN)的小向导RNA(sgRNA),并优化了CRISPR/Cas9系统显微注射参数.结果表明,胚胎供体发情停止后第4天放置阴道栓可有效提高黄体数(15.25±3.69)和受精卵数量(13.875±4.015);利用微量注射泵将Cas9mRNA(60 ng/μL)和打靶MSTN基因的sgRNAs(60 ng/μL)混合液注射到受精卵胞质内,注射参数Pi,Ti和Pc分别为300,0.5和60,注射24 h后胚胎分裂率为76.79%.胚胎移植时受体发情结束时间晚于供体发情结束时间12~16 h妊娠率最高(38.46%).本研究共得到19个存活的个体,经TA克隆测序分析,所有个体MSTN打靶位点上均发现碱基的插入或缺失.综上,本研究以子午岭黑山羊为例,建立了受精卵注射CRISPR/Cas9系统制备基因编辑山羊的技术体系,为利用CRISPR/Cas9技术进行山羊的遗传改造奠定了技术基础.
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