| CTB-FimA融合蛋白原核表达纯化及其免疫效果 |
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| 引用本文： | 梁梦歌,李智涛,韩海芳,王烁,陈义祥,高社干.CTB-FimA融合蛋白原核表达纯化及其免疫效果[J].生物技术,2024(1):12-19. |
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| 作者姓名： | 梁梦歌 李智涛 韩海芳 王烁 陈义祥 高社干 |
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| 作者单位： | 1. 河南科技大学基础医学与法医学院;2. 河南科技大学临床医学院,河南科技大学第一附属医院,河南科技大学肿瘤研究所,河南省肿瘤表观遗传重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(81972571)； |
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| 摘 要： | 目的]构建牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌毛蛋白(FimA)与霍乱毒素B亚基(CTB)重组质粒pET-32a/CTB-FimA,表达纯化CTB-FimA融合蛋白并对其黏膜免疫效果进行研究。方法]根据GenBank查找FimA基因和CTB基因，利用(Gly4Ser)3连接肽序列构建pET-32a/CTB-FimA原核表达质粒，转化至大肠杆菌BL21(DE3),确定IPTG诱导浓度及温度，SDS-PAGE分析目的蛋白的可溶性；采用亲和层析和凝胶过滤层析纯化目的蛋白CTB-FimA;用纯化的目的蛋白作为免疫原鼻腔滴注免疫BALB/c小鼠观察其黏膜免疫效果。结果]经双酶切和测序鉴定pET-32a/CTB-FimA重组表达质粒构建成功；IPTG最适诱导浓度为0.5 mmol/L,最适诱导温度为23℃,重组蛋白CTB-FimA主要以可溶形式表达；Expasy软件ProtParam工具预测重组蛋白分子量约为72.08 kDa,亲水性总平均值为-0.313;每升发酵液表达CTB-FimA蛋白约100 mg;免疫...
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| 关 键 词： | 牙龈卟啉单胞菌 CTB-FimA重组蛋白 诱导表达 亲和层析 凝胶过滤层析 鼻腔黏膜免疫 |
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