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| 棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的原核表达及蛋白纯化鉴定 | |
| 引用本文： | 李波,倪志勇,石庆华,范玲.棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的原核表达及蛋白纯化鉴定[J].西北植物学报,2010,30(9). |
| 作者姓名： | 李波 倪志勇 石庆华 范玲 |
| 作者单位： | 1. 新疆农业科学院,核技术生物技术研究所,乌鲁木齐,830091;新疆农业大学,农学院,乌鲁木齐,830052 2. 新疆农业科学院,核技术生物技术研究所,乌鲁木齐,830091 3. 新疆农业大学,农学院,乌鲁木齐,830052 |
| 基金项目： | 国家"863"项目，农业部转基因重大专项，新疆自治区高技术研究发展计划项目，国家自然科学基金 |
| 摘 要： | 为获得大量高纯度的GhCOMT2蛋白以便研究其功能和性质,以pMD18-GhCOMT2质粒为模板,PCR扩增GhCOMT2基因的cDNA编码区,构建原核表达载体pET-28a-GhCOMT2,经酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中进行诱导表达,并采用Western blotting方法鉴定表达产物.结果表明:在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达了与标签蛋白融合的GhCOMT2蛋白,大小约为40.062 kD,浓度为0.62 mg/mL.重组蛋白的最佳诱导条件为:0.2 mmol/L IPTG在16℃诱导12 h.重组蛋白以可溶形式高效表达,用蛋白标签亲和层析柱(His TrapTM HP)获得纯化重组蛋白,Western blotting分析表明其能与His多克隆抗体起特异性反应. |
| 关 键 词： | 原核表达 蛋白纯化 |
Prokaryotic Expression,Protein Purification and Western Blotting Identification of GhCOMT2 Gene from Gossypium hirsutum L. |
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| LI Bo,NI Zhi-yong,SHI Qing-hua,FAN Ling.Prokaryotic Expression,Protein Purification and Western Blotting Identification of GhCOMT2 Gene from Gossypium hirsutum L.[J].Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica,2010,30(9). | |
| Authors: | LI Bo NI Zhi-yong SHI Qing-hua FAN Ling |
| Abstract: | |
| Keywords: | GhCOMT2 Western blotting |
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