| pIRES2-NGF-NT-3真核表达载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 栗炳南,李卫东,林俊堂,丰慧根,原志庆.pIRES2-NGF-NT-3真核表达载体的构建与鉴定[J].生命科学研究,2014(4):315-322. |
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| 作者姓名： | 栗炳南 李卫东 林俊堂 丰慧根 原志庆 |
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| 作者单位： | 新乡医学院生命科学技术学院; |
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| 基金项目： | 河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A180850);新乡医学院重点领域招标课题(ZD2011-16);新乡医学院科研培育基金项目(2013QN117);新乡医学院研究生科研创新支持计划项目(YJSCX201231Y);新乡医学院博士启动金项目(2011);2010年度河南省省院科技合作项目(102106000017);2012年度河南省重大科技攻关项目(122101310100) |
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| 摘 要： | 构建双基因共表达载体pIRES2-NGF-NT-3并检测其在HEK293细胞中的表达。人神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和神经营养素3(neurotrophin-3,NT-3)是采用直接PCR的方法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取,将人神经生长因子的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建成为pIRES2-NGF-EGFP。神经营养素3 cDNA片段通过替换绿色荧光蛋白基因(EGFP)的方式插入到pIRES2-NGFEGFP中构建成为pIRES2-NGF-NT-3双基因共表达载体,将pIRES2-NGF-NT-3用脂质体转染HEK293细胞并采用RT-PCR与Western-blot的方法检测其表达。人神经生长因子和神经营养素3被克隆,通过测序和酶切鉴定的得知与基因库报道序列一致。pIRES2-NGF-NT-3转染HEK293细胞后双基因在mRNA和蛋白水平均得到了表达。人神经生长因子和神经营养素3双基因真核表达载体成功构建,它提供了一个新的表达系统,为进一步研究双基因的功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 人神经生长因子 神经营养素3 真核双表达载体 内部核糖体进入位点 |
Construction and Identification of pIRES2-NGF-NT-3 Bicistronic Eukaryotic Expression Vector |
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