| Flt3配体胞外域的原核表达纯化及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 刘强,郑瑾,赵星成,刘利,郝淼旺,陈任安,韩骅,梁英民.Flt3配体胞外域的原核表达纯化及活性鉴定[J].现代生物医学进展,2010,10(21). |
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| 作者姓名： | 刘强 郑瑾 赵星成 刘利 郝淼旺 陈任安 韩骅 梁英民 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)重点项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建pET32a(+)-hFLext原核表达载体,诱导hFLext蛋白表达、纯化及活性鉴定.方法:以人淋巴细胞cDNA文库为模板,克隆hFlext,构建pET32a(+)-hFLext重组表达载体.转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定.细胞增殖实验检测其生物学活性.结果:成功克隆获得hFLext,并构建了pET32a(+)-hFLext重组表达载体.在大肠杆菌BL21,经1 mM IPTG 30℃诱导12 h,成功表达Trx-hFLext融合蛋白,主要以包涵体形式存在.经8M尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析纯化蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定,成功获得高纯度的Trx-hFLext融合蛋白.细胞增殖实验证实其具有生物学活性,能够有效刺激脐血细胞增殖.结论:成功构建了pET32a(+)-hFLext重组表达载体,表达、纯化了具有生物学活性的Trx-hFLext融合蛋白,为造血干/祖细胞的体外扩增研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | Flt3配体 原核表达 蛋白纯化 造血干/祖细胞扩增 |
Prokaryotic expression, purification and characterization of the extracellular domain of human Flt3 ligand |
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| LIU Qiang,ZHENG Jin,ZHAO Xing-cheng,LIU Li,HAO Miao-wang,CHEN Ren-an,HAN Hua,LIANG Ying-min.Prokaryotic expression, purification and characterization of the extracellular domain of human Flt3 ligand[J].Progress in Modern Biomedicine,2010,10(21). |
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| Authors: | LIU Qiang ZHENG Jin ZHAO Xing-cheng LIU Li HAO Miao-wang CHEN Ren-an HAN Hua LIANG Ying-min |
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