| CHO/dhfr-细胞定点整合高效表达系统的建立 |
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| 引用本文： | 周宏,刘志刚,孙志伟,俞炜源.CHO/dhfr-细胞定点整合高效表达系统的建立[J].微生物学报,2007,23(4). |
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| 作者姓名： | 周宏 刘志刚 孙志伟 俞炜源 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院 生物工程研究所蛋白质工程研究室，北京 100071;军事医学科学院 生物工程研究所蛋白质工程研究室，北京 100071;军事医学科学院 生物工程研究所蛋白质工程研究室，北京 100071;军事医学科学院 生物工程研究所蛋白质工程研究室，北京 100071 |
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| 基金项目： | 国家高技术“863”计划基金资助（No. 2001AA215351）。 |
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| 摘 要： | 为了克服随机整合建立高表达细胞株时“位置效应”所带来的不可预知的后果，我们尝试建立基于定点整合的CHO高效表达系统。首先设计一个新的高效筛选载体pMCEscan。该载体含有报告基因(k2tPA)、扩增基因（dhfr）、重组酶识别序列(FRT)及筛选基因（neo），且neo基因的表达经过系统的弱化，确保能够对基因组中的整合位点进行大规模的高效筛选。然后利用该载体转染CHO/dhfr－细胞并进行大规模筛选以获得足够多的阳性克隆，并对阳性克隆进行系统分析，筛选出报告基因表达水平高、单拷贝且扩增效果好的克隆，此克隆被认为筛选载体整合入CHO细胞基因组中转录热点（Hot spot）区域，从而获得了能够实现外源基因在基因组中定点整合和有效表达的CHO/dhfr-细胞系。随后利用位点特异性重组系统（FLP-FRT）将外源基因定点整合到Hot spot区域，以实现外源基因在CHO细胞基因组中的定点整合及高效表达。并利用该细胞系实现了k2tPA的高表达，表达量达到17.1μg/106cell·24h。该研究致力于CHO细胞基因组中高表达位点的寻找和确认，建立基于定点整合的哺乳动物细胞高效表达系统。
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| 关 键 词： | CHO细胞， 定点整合， 高效表达， 重组蛋白 |
Development of Site-specific Integration System to High-level Expression Recombinant Proteins in CHO Cells |
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| ZHOU Hong,LIU Zhi-Gang,SUN Zhi-Wei and YU Wei-Yuan.Development of Site-specific Integration System to High-level Expression Recombinant Proteins in CHO Cells[J].Acta Microbiologica Sinica,2007,23(4). |
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| Authors: | ZHOU Hong LIU Zhi-Gang SUN Zhi-Wei and YU Wei-Yuan |
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| Institution: | Lab for protein engineering, Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China;Lab for protein engineering, Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China;Lab for protein engineering, Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China;Lab for protein engineering, Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | recombinant protein high-level expression site-specific integration Chinese hamster ovary (CHO) |
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