利用CRISPRi下调MDR1基因表达增强肺腺癌A549/DDP细胞对顺铂敏感性

目的:探讨利用CRISPRi下调MDR1基因表达增强肺腺癌A549/DDP细胞对顺铂敏感性的作用。方法:利用生物信息学技术预测MDR1基因启动子上潜在的CRISPRi干扰位点，设计干扰片段并构建重组载体，采用qRT-PCR、Western blot方法检测各组细胞中MDR1基因mRNA以及蛋白表达水平，筛选干扰效率高的重组载体进行后续实验。将人肺癌A549/DDP细胞分为3组，分别为A549/DDP、Scrambed、sgRNA-MDR1-1,每组设置3个复孔。将各载体转染细胞48 h后，流式细胞术检测各组细胞外排情况，MTT法检测各组细胞的IC₅₀值，激光共聚焦显微镜下观察各组细胞经顺铂处理后的细胞形态。结果:经测序比对，成功构建两种干扰MDR1基因转录的CRISPRi重组载体。转染A549/DDP细胞后，各转染组细胞MDR1基因mRNA以及蛋白水平均显著降低(P<0.01),其中sgRNA-MDR1-1的干扰效率最高，mRNA和蛋白水平干扰效率分别达60%和51%。与Scrambed组相比，转染sgRNA-MDR1-1组细胞的细胞外排能力降低(P<...