| 用Overlap-PCR法从Trichodermareesei QM9414基因组DNA中克隆并表达木聚糖酶Ⅲ |
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| 引用本文： | 陆长梅, 袁生, 赵庆新,.用Overlap-PCR法从Trichodermareesei QM9414基因组DNA中克隆并表达木聚糖酶Ⅲ[J].生物工程学报,2004,20(5). |
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| 作者姓名： | 陆长梅 袁生 赵庆新 |
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| 作者单位： | 江苏省资源生物技术重点实验室 南京师范大学生命科学学院微生物工程重点实验室; |
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| 摘 要： | 禾本科植物木聚糖酶在其成熟过程中需在细胞进入程序性死亡后 ,经蛋白水解酶多次剪切方显活性 ,常规蛋白质克隆表达系统无法表达这类酶。通过GenBank搜索获得一与之同族、结构相似的来源于T .reeseiQM94 1 4(ATCC2 6 92 1 )突变种PC 3 7菌株的xynⅢ。但该酶在T .reeseiQM9414中不表达 ,而在基因组中存在。通过overlap PCR法将 4个外显子分别克隆、测序 ,再连接测序 ,最终获得该基因的全长cDNA序列。将该基因连接到表达载体pETBlue-2上 ,并转化到TunerDE3表达菌株中 ,常规条件下可表达并有木聚糖酶活性显示。低温 (15℃)64h诱导显著提高可溶性xynⅢ酶活.
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| 关 键 词： | 木聚糖酶 T.reeseiQM9414 overlap-PCR |
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