从噬菌体展示随机12肽库中筛选与IRS-1PH结构域相结合的多肽模体

将胰岛素受体底物-1(IRS-1)的PH结构域(pleckstrin homology domain)编码序列克隆到融合表达载体pRSETA中，阳性克隆经IPTG诱导，表达出氨基端带6个连续组氨酸残基的融合蛋白。经检测，表达的目的蛋白一部分以可溶形式存在。利用Ni-NTA金属螯合亲和层析法在非变性条件下对表达的目的蛋白进行纯化，纯度大于98％。将纯化的目的蛋白包被于聚苯乙烯平皿上作为靶蛋白，经过4轮淘筛，得到能够与IRS-1的PH结构域相结合的重组噬菌体克隆；从中随机挑选出50个克隆进行DNA序列测定，对获得的短肽序列进行了分析。并通过ELISA检测了这些克隆与IRS-1的PH结构域的结合活性。