| 人血管抑素（k1—3）在家蚕细胞和幼虫中的表达及活性测定 |
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| 引用本文： | 王莹飞,金勇丰,张耀洲.人血管抑素（k1—3）在家蚕细胞和幼虫中的表达及活性测定[J].生物化学与生物物理学报,2002,34(4):482-487. |
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| 作者姓名： | 王莹飞 金勇丰 张耀洲 |
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| 作者单位： | 浙江大学生物化学研究所 杭州310029
(王莹飞，金勇丰)，浙江大学生物化学研究所 杭州310029(张耀洲) |
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| 基金项目： | 浙江省自然科学基金资助项目 (No .3 992 13 )~~ |
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| 摘 要： | 将人血管抑素 (angiostatin)基因重组于家蚕杆状病毒转移载体 pBacPAK8中 ,获得重组转移载体pBacPAK angiostatin ,并与被线性化的Bm BacPAK6病毒DNA共转染家蚕细胞 ,获得重组病毒BacPAK angiostatin。DNA点杂交结果表明重组病毒基因组中含有血管抑素基因。重组病毒以MOI=10感染家蚕细胞 (2×10 6个细胞 /瓶 )和家蚕 5龄幼虫 ,表达产物用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞 (ECV30 4 )及体内鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管实验检测其抑制活性 ,测得血管抑素可明显抑制体外培养的内皮细胞增殖 ,家蚕细胞的产物活性在表达 72h达到最高值 ,在 2× 10 6个细胞中的表达量约 2 2u ;在家蚕体内表达 14 4h生物活性达到最高值 ,表达量约 15 9u/ml。2 .5u/ml的血管抑素能使ECV30 4细胞在 2 4h发生明显凋亡 ;可使CAM新生血管化率明显下降。此外 ,用ELISA、Western印迹方法测定了表达产物的免疫反应性。
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| 关 键 词： | 人血管抑素 家蚕杆状病毒表达载体系统 内皮细胞 表达 |
Expression and Activity Determination of Human Angiostatin (k1-3) in Culture Cells and Larvae of Silkworm |
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| WANG Ying Fei ,JIN Yong Feng,ZHANG Yao Zhou.Expression and Activity Determination of Human Angiostatin (k1-3) in Culture Cells and Larvae of Silkworm[J].Acta Biochimica et Biophysica Sinica,2002,34(4):482-487. |
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| Authors: | WANG Ying Fei JIN Yong Feng ZHANG Yao Zhou |
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| Institution: | WANG Ying Fei *,JIN Yong Feng,ZHANG Yao Zhou |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human angiostatin Bombyx mori baculovirus expression vector system endothelisal cells expression |
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