扣囊复膜孢酵母β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的克隆与表达

利用PCR技术，从扣囊复膜孢酵母的总DNA中扩增得到β-葡萄糖苷酶（β-Glucosidase）基因 (BGL1)，长度为2596 bp，连接到pGEMT载体上，用限制性内切酶切下目的基因，插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中，使之位于α-因子信号肽下游，且与之同框, 构建成重组质粒pSHL9K。 通过电转化将重组质粒pSHL9K插入到Pichia pastoris GS115菌株染色体中，获得高效表达BGL1基因的毕赤酵母重组工程菌株。重组酶的最适温度为50℃，最适pH为5.4。培养基中β-葡萄糖苷酶活性最高可达47U/mL。