| 猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4-F112弱毒株NSP2区表达猪瘟病毒E2基因表位的研究 |
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| 引用本文： | 徐彦召,周艳君,童武,李玲,姜一峰,童光志.猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4-F112弱毒株NSP2区表达猪瘟病毒E2基因表位的研究[J].病毒学报,2013(1):17-25. |
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| 作者姓名： | 徐彦召 周艳君 童武 李玲 姜一峰 童光志 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院上海兽医研究所;河南科技学院动物科学学院 |
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| 基金项目： | “863”计划项目“家畜病毒病基因工程疫苗创制”(2011AA10A208);国际合作项目(2010DF33920);NSFC-广联合基金项目(U0931003);国家自然科学基金项目(31100121);中央科研院所公益性基础科研业务费项目(2011JB03) |
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| 摘 要： | 建立共表达猪瘟病毒(Classic swine fever virus,CSFV)E2蛋白主要中和性抗原表位基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,为进一步研究PRRSV作为病毒载体提供实验数据。本研究在PRRSVHuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础上,采用突变PCR技术将CSFV E2蛋白的主要中和性抗原表位基因插入HuN4-F112弱毒株PRRSV已鉴定出的两个NSP2蛋白的复制非必需区,经基因片段的克隆、拼接,构建了两株含有CSFV E2蛋白的主要中和性抗原表位基因的感染性PRRSV cDNA克隆psk-HuN4-F112-Δ508-532+E2和psk-HuN4-F112-Δ480-532+E2。用限制性内切酶SwaΙ分别将两株共表达的感染性克隆线性化,之后通过细胞外转录获得病毒RNA,用脂质体法分别将病毒RNA转染BHK-21细胞包装出病毒粒子,再分别将其转接到MARC-145细胞传代拯救出两株病毒。分别对两株拯救病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定。结果表明,两株拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记(拯救病毒基因组的14 667位因同义突变产生的MluⅠ酶切位点)和插入基因序列。间接免疫荧光试验表明,CSFV E2蛋白主要中和性抗原表位基因均能在两株拯救的PRRSV中表达,且能够在其传代过程中稳定遗传。病毒生长特性结果比较显示两株拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性。本研究构建了两株共表达CSFV E2蛋白主要中和性抗原表位基因的PRRSV感染性克隆并获得了拯救病毒,且外源基因能在拯救病毒中稳定表达,为进一步开发新型PRRSV二联疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 感染性cDNA 拯救病毒 病毒载体 |
Study on Using NSP2 Protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(HuN4-F112) to Express E2 Neutralizing Epitope of Classical Swine Fever Virus |
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| XU Yan-zhao,ZHOU Yan-jun,TONG Wu,LI Ling,JIANG Yi-feng,TONG Guang-zhi.Study on Using NSP2 Protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(HuN4-F112) to Express E2 Neutralizing Epitope of Classical Swine Fever Virus[J].Chinese Journal of Virology,2013(1):17-25. |
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| Authors: | XU Yan-zhao ZHOU Yan-jun TONG Wu LI Ling JIANG Yi-feng TONG Guang-zhi |
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| Institution: | 1(1.Chinese Academy of Agricultural Sciences,Shanghai Veterinary Research Institute,Shanghai 200241,China; 2.Department of Animal Science,Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003,China) |
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| Abstract: | |
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