| 嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 秦江楠,毕春霞,陈秀琴,罗 玮,张 卫,任 莹,王 斌,闫志勇.嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株的构建及鉴定[J].微生物学杂志,2014(3):30-35. |
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| 作者姓名： | 秦江楠 毕春霞 陈秀琴 罗 玮 张 卫 任 莹 王 斌 闫志勇 |
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| 作者单位： | 青岛大学医学院 微生物学教研室，山东 青岛 266071,青岛市市立医院，山东 青岛 266071,青岛大学医学院 微生物学教研室，山东 青岛 266071,青岛市市立医院，山东 青岛 266071,青岛大学医学院 微生物学教研室，山东 青岛 266071,青岛大学医学院 微生物学教研室，山东 青岛 266071,青岛大学医学院 微生物学教研室，山东 青岛 266071,青岛大学医学院 微生物学教研室，山东 青岛 266071 |
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| 基金项目： | 山东省优秀中青年科学家科研奖励基金（BS2011SW005）；山东省科技公关基金（2007GG3WZ05009） |
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| 摘 要： | 为深入研究smp基因的功能,需构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株。首先,PCR扩增D2株smp基因上游、下游片段作为上下游同源臂,同时扩增获得氯霉素抗性(cat)基因,采用SOE-PCR方法将各片段连接,然后双酶切后克隆入自杀质粒pEX18Tc,构建获得重组自杀质粒pEX18Tc-Δsmp/cat,并转化入大肠埃希菌SM10λpir。通过接合将重组自杀质粒转入嗜麦芽寡养单胞菌D2野生株,经同源重组以cat基因替换野生株的smp基因,链霉素和氯霉素双抗培养基筛选接合子,15%蔗糖选择培养基筛选smp基因缺失株。PCR、酶切和测序验证重组自杀质粒pEX18Tc-Δsmp/cat构建正确,缺失株的分泌蛋白经12%SDS-PAGE证实嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株失去表达SMP蛋白的能力。结果显示成功获得smp基因缺失的嗜麦芽寡养单胞菌D2株,为进一步研究其功能和胞外分泌途径奠定基础。
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| 关 键 词： | 嗜麦芽寡养单胞菌 自杀质粒 同源重组 基因敲除 |
Establishment & Identification of a smp Gene Deletion Mutant of Stenotrophomonas maltophilia D2 |
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| QIN Jiang-Nan,BI Chun-Xi,CHEN Xiu-Qin,LUO Wei,ZHANG Wei,REN Ying,WANG Bin and YAN Zhi-Yong.Establishment & Identification of a smp Gene Deletion Mutant of Stenotrophomonas maltophilia D2[J].Journal of Microbiology,2014(3):30-35. |
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| Authors: | QIN Jiang-Nan BI Chun-Xi CHEN Xiu-Qin LUO Wei ZHANG Wei REN Ying WANG Bin and YAN Zhi-Yong |
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| Institution: | Dept. of Microbiol. , Med. Coll., Qingdao Uni.Shandong 266071,Qingdao Municipal Hosp., Qingdao, Shandong 266071,Dept. of Microbiol. , Med. Coll., Qingdao Uni.Shandong 266071,Qingdao Municipal Hosp., Qingdao, Shandong 266071,Dept. of Microbiol. , Med. Coll., Qingdao Uni.Shandong 266071,Dept. of Microbiol. , Med. Coll., Qingdao Uni.Shandong 266071,Dept. of Microbiol. , Med. Coll., Qingdao Uni.Shandong 266071 and Dept. of Microbiol. , Med. Coll., Qingdao Uni.Shandong 266071 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Stenotrophomonas maltophilia suicide plasmid homologous recombination gene knockout |
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