| 盐藻PDS基因的同源克隆及在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 周峰,黄非,白林含.盐藻PDS基因的同源克隆及在大肠杆菌中的表达[J].微生物学报,2015,55(2):149-155. |
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| 作者姓名： | 周峰 黄非 白林含 |
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| 作者单位： | 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，四川成都610064,四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，四川成都610064,四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，四川成都610064 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30970043) |
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| 摘 要： | 【目的】八氢番茄红素脱氢酶PDS为真核膜结合蛋白,我们通过更换不同的表达策略,探索在大肠杆菌中表达真核膜结合蛋白的方式。【方法】利用RACE的方法克隆盐藻PDS的全长c DNA序列。利用原核表达载体p ET-28a构建p ET-28a-PDS表达载体;使用PLtac启动子替换T7启动子构建p ET-PLtacPDS表达载体;合成Mistic序列融合入p ET-28 a中构建了p ET-Mistic-PDS融合表达载体。分别转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。【结果】获得了盐藻PDS基因的全长c DNA序列2237 bp,开放阅读框为1749 bp,共编码582个氨基酸(NCBI登录号为GQ923693.1)。利用p ET-28a-PDS和p ET-PLtacPDS表达的PDS蛋白表达量低,并以包涵体形式存在;利用p ET-Mistic-PDS载体表达的PDS蛋白表达量明显提高,且大部分以可溶蛋白形式存在,具有脱氢酶活性。【结论】实验结果表明Mistic作为促溶标签能促进膜蛋白的正确折叠,提高蛋白的可溶性。蛋白酶活测定结果证明了Mistic的融合可以保持蛋白的天然活性。
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| 关 键 词： | 盐藻PDS基因 同源克隆 原核表达 PLtac启动子 Mistic序列 |
| 收稿时间： | 2014/4/14 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2014/5/18 0:00:00 |
Homologous cloning and expression of PDS gene from Dunaliella salina in Escherichia coli |
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| Feng Zhou,Fei Huang and Linhan Bai.Homologous cloning and expression of PDS gene from Dunaliella salina in Escherichia coli[J].Acta Microbiologica Sinica,2015,55(2):149-155. |
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| Authors: | Feng Zhou Fei Huang and Linhan Bai |
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| Institution: | Feng Zhou;Fei Huang;Linhan Bai;Key Laboratory of Bio-resources and Eco-environment of Ministry of Education,College of Life Sciences, Sichuan University; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Dunaliella salina PDS gene homologous cloning prokaryotic expression PLtac promoter Mistic sequence |
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