| 双启动子促进亮氨酸脱氢酶在Bacillus subtilis中表达及发酵研究 |
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| 引用本文： | 张玲,王男,金吕华,林荣,杨海麟.双启动子促进亮氨酸脱氢酶在Bacillus subtilis中表达及发酵研究[J].中国生物工程杂志,2018,38(12):21-31. |
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| 作者姓名： | 张玲 王男 金吕华 林荣 杨海麟 |
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| 作者单位： | 江南大学工业生物技术教育部重点实验室 无锡 214122 |
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| 基金项目： | * 江苏省产学研(BY2016022-40);*国家轻工技术与工程一流学科自主课题(2018-23) |
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| 摘 要： | 为了促进亮氨酸脱氢酶在Bacillus subtilis中高效表达,采取在质粒pMA5自带的启动子P_(HpaⅡ)之后分别添加诱导型和组成型启动子,考察双启动子对酶表达的影响。选取2种诱导型启动子(P_(grac)、P_(gl-M1))和4种组成型启动子(P_(43)、P_(laps)、P_(HpaⅡ)、P_(amyQ))进行构建表达,其中组成型启动子P_(amyQ)与P_(HpaⅡ)构成的双启动子效果最好,有效地将胞外活性提高到31. 24U/ml,是单启动子PHpaⅡ的3. 4倍。在以上最优双启动子的基础上分别融合Sec途径和Tat途径的4种信号肽,但信号肽与双启动子共同作用并没有获得更高的酶活性。选用酶活最高的双启动子突变菌株Bacillus subtilis168/pW6(P_(HpaⅡ)-P_(amyQ))进行7. 5L发酵罐补料发酵产酶研究,LeuDH酶活达到217. 96U/ml,是摇瓶水平的6. 97倍,对工业上产亮氨酸脱氢酶有一定参考价值。
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| 关 键 词： | 亮氨酸脱氢酶 枯草芽孢杆菌 启动子 信号肽 发酵产酶 |
| 收稿时间： | 2018-06-11 |
To Promote the Expression of Leucine Dehydrogenase in Bacillus subtilis via Dual-Promoter and Fermentation Research |
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| ZHANG Ling,WANG Nan,JIN Lv-hua,LIN Rong,YANG Hai-lin.To Promote the Expression of Leucine Dehydrogenase in Bacillus subtilis via Dual-Promoter and Fermentation Research[J].China Biotechnology,2018,38(12):21-31. |
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| Authors: | ZHANG Ling WANG Nan JIN Lv-hua LIN Rong YANG Hai-lin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Leucine dehydrogenase Bacillus subtilis Dual-promoter Signal peptide Fermentation enzyme production |
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