| 利用CRISPR/Cas9技术构建AEG-1基因敲除U251细胞系并探讨其转移行为的特点 |
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| 引用本文： | 盛玉瑞,李斌,王斌,左娣,马琳,任晓璠,郭乐,刘昆梅.利用CRISPR/Cas9技术构建AEG-1基因敲除U251细胞系并探讨其转移行为的特点[J].中国生物工程杂志,2018,38(10):38-47. |
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| 作者姓名： | 盛玉瑞 李斌 王斌 左娣 马琳 任晓璠 郭乐 刘昆梅 |
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| 作者单位： | 1 宁夏医科大学临床医学院 银川 7500042 宁夏医科大学宁夏颅脑疾病重点实验室 银川 7500043 宁夏临床微生物重点实验室 宁夏医科大学总医院 银川 750003 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金(31660267);宁夏回族自治区2016年大学生创新(201610752012);教育部“春晖计划”合作科研(Z2016060);宁夏高等学校科学技术研究(NGY201591);宁夏回族自治区“十三五”重大科技(2016BZ07) |
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| 摘 要： | 星形胶质细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)在多种肿瘤中过表达,参与肿瘤的形成、转移等过程。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除AEG-1基因并研究其在胶质瘤细胞转移过程中的作用。首先设计构建sgRNA/Cas9二合一表达载体并转染到人胶质瘤U251细胞中,通过TA克隆测序鉴定sgRNA的活性;然后筛选建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,并利用Western blot实验检测AEG-1的敲除效率;最后利用Transwell小室、划痕实验评价AEG-1敲除后对肿瘤细胞迁移能力的影响。结果显示,成功构建靶向敲除AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体,所构建的载体与实验设计相一致,通过TA克隆测序鉴定sgRNA有活性;成功建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,Western blot实验结果表明敲除效率高达98%; Transwell小室实验、划痕实验结果表明AEG-1敲除U251细胞系的转移能力明显降低。
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| 关 键 词： | 星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1) CRISPR/Cas9 基因敲除 U251细胞 |
| 收稿时间： | 2018-05-10 |
The Construction of AEG-1-Knockout U251 Cell Line by CRISPR/Cas9 Technology and Study of The Effect of AEG-1 on the Metastasis in U251 Cells |
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| Yu-rui SHENG,Bin LI,Bin WANG,Di ZUO,Lin MA,Xiao-fan REN,Le GUO,Kun-mei LIU.The Construction of AEG-1-Knockout U251 Cell Line by CRISPR/Cas9 Technology and Study of The Effect of AEG-1 on the Metastasis in U251 Cells[J].China Biotechnology,2018,38(10):38-47. |
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| Authors: | Yu-rui SHENG Bin LI Bin WANG Di ZUO Lin MA Xiao-fan REN Le GUO Kun-mei LIU |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Astrocyte elevated gene-1(AEG-1) CRISPR/Cas9 Gene knockout U251 cells |
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