| 理性设计二硫键提高华根霉脂肪酶热稳定性 |
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| 作者姓名： | 王睿 喻晓蔚 徐岩 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室 江苏 无锡 214122;2. 江南大学药学院 江苏 无锡 214122;3. 宿迁市江南大学产业技术研究院 江苏 宿迁 223814,1. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室 江苏 无锡 214122;3. 宿迁市江南大学产业技术研究院 江苏 宿迁 223814,1. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室 江苏 无锡 214122;3. 宿迁市江南大学产业技术研究院 江苏 宿迁 223814 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31671799);江苏省“六大人才高峰”人才项目(NY-010) |
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| 摘 要： | 【背景】华根霉脂肪酶的工业应用前景广泛,但是受到酶热稳定性较差的限制。【目的】对华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶r27RCL分子结构进行理性设计,以提高该酶热稳定性。【方法】以Disulfide by design软件筛选r27RCL分子表面能够形成二硫键的突变位点,共得到7对二硫键突变。利用全质粒PCR进行定点突变,并在毕赤酵母中表达获得突变酶。【结果】最佳突变酶m9/10 (S85C-Q145C)与野生型酶r27RCL相比,60°C下的半衰期分别提高了4.5倍,T_m值提高了4.2°C,而催化活性保持不变。蛋白质晶体结构模拟显示,位于β2折叠上的85C和位于α4螺旋上的145C可形成二硫键,从而提高酶的热稳定性。【结论】酶分子中引入新增二硫键可以显著提升酶的热稳定性。
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| 关 键 词： | 华根霉脂肪酶 热稳定性 二硫键 理性设计 |
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