黄地老虎颗粒体病毒DNA片段在枯草芽孢杆菌中的克隆和启动氯霉素抗性基因表达

黄地老虎颗粒体病毒(Agrotis segetum granulosis virus简称AsGv)DNA和pPL603质粒DNA，用限制性核酸内切酶EcoR I酶切后，再用T4连接酶连接，转化枯草芽孢杆菌BRl51感受态细胞。然后在loμg／m1氯霉素的sPBY选择平皿上筛选，得到了抗氯霉素的转化子。经过琼脂糖凝胶电泳检测，转化于中的重组质粒比原载体pPL603质粒分子量大。由于重组质粒上的抗性表达水平可达250μg／m1氯霉素，比pPL603质粒抗性表达水平(5μg／m1)提高50倍。所以重组质粒携带了有启动作用的DNA片段。启动功能片段的分子量，经琼脂糖凝胶电泳测定约为O．9kb。除进行DNA—DNA分子杂交确证外，并用重组质粒pAsGVPl5进行了第二次转化、抗性水平测定和分子量分析。