| 聚丙烯酸分离纯化苦瓜种仁碱性蛋白的方法及影响因素 |
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| 引用本文： | 张海花,汪俏梅,胡家恕,童富淡.聚丙烯酸分离纯化苦瓜种仁碱性蛋白的方法及影响因素[J].微生物学报,2007,23(4). |
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| 作者姓名： | 张海花 汪俏梅 胡家恕 童富淡 |
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| 作者单位： | 浙江理工大学生命科学学院，杭州 310018;浙江大学，杭州 310029;浙江大学，杭州 310029;浙江大学，杭州 310029;浙江理工大学生命科学学院，杭州 310018;浙江大学，杭州 310029 |
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| 基金项目： | 浙江省科学技术厅资助项目（No. 2004C32014）。 |
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| 摘 要： | 以苦瓜籽为材料，研究了聚丙烯酸分离纯化苦瓜种仁碱性蛋白的方法及影响因素。等电点沉淀试验表明，柠檬酸、盐酸分别调节苦瓜种仁粗提液pH至6.0、4.0时，各有14.62%和32.49%的苦瓜种仁蛋白被沉淀。醋酸的等电点沉淀作用呈现阶段性特点，pH 6.0和4.0时分别有26.17%和38.72%的苦瓜种仁蛋白被沉淀。醋酸、盐酸和柠檬酸处理的1mL苦瓜种仁粗提液（pH 4.0），1%PAA选择性沉淀碱性蛋白（等电点pI为8.65～9.30）的最佳用量分别为100μL、120μL和100μL。醋酸调节苦瓜种仁粗提液pH分别至5.0、4.0和3.0，等电点沉淀后的上清液用PAA沉淀碱性蛋白，当PAA（1%）用量为160μL/mL提取液时，pH5.0和3.0样液分别有33.77%和43.56%蛋白质被沉淀；当PAA用量为120μL/mL提取液时，pH 4.0样液中30.83%蛋白质被沉淀。PAA-蛋白质复合物溶解于碱性溶液（pH＞9.0），当溶液NaCl浓度为3.0%时，溶液蛋白质浓度最高。PAA选择性沉淀的苦瓜种仁碱性蛋白经Sephadex G-75柱层析分离，分别在175min和300min出现主峰Ⅰ和Ⅱ。SDS-PAGE和IEF分析表明主峰Ⅰ的分子量约为30kD，pI值约为9.5，主峰Ⅱ的分子量约为10kD，pI值约为9.3。
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| 关 键 词： | 聚丙烯酸，碱性蛋白，SDS-PAGE，IEF，苦瓜 |
The Method and Influencing Factors of Alkalescency Protein Purification from Bitter Melon (Momordica charantia) Seeds by Polyacrylicacid Precipitation |
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| ZHANG Hai-Hu,WANG Qiao-Mei,HU Jia-Shu and TONG Fu-Dan.The Method and Influencing Factors of Alkalescency Protein Purification from Bitter Melon (Momordica charantia) Seeds by Polyacrylicacid Precipitation[J].Acta Microbiologica Sinica,2007,23(4). |
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| Authors: | ZHANG Hai-Hu WANG Qiao-Mei HU Jia-Shu and TONG Fu-Dan |
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| Institution: | College of Life Sciences, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China;Zhejiang University, Hangzhou 310029, China;Zhejiang University, Hangzhou 310029, China;Zhejiang University, Hangzhou 310029, China;College of Life Sciences, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China;Zhejiang University, Hangzhou 310029, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | polyacrylic acid alkalescence protein SDS-PAGE (sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis) IEF (isoelectric focusing) Momordica charantiaL |
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