表达大肠杆菌分子伴侣GroEL、GroES和GrpE载体的构建及其应用

大肠杆菌（Escherichia coli）共表达系统常要求质粒具有不同抗生素抗性以及不同的复制子。利用粘性末端PCR技术，以含有大肠杆菌分子伴侣基因GroEL、GroES和唧E的pR—GESP质粒为模板，设计两对引物，通过两次独立的PCR反应扩增3个基因的多顺反子，将形成粘性末端的PCR产物插入NcoI和Xho1酶切的pACY．CDuet-1质粒，构建的pA—GESP质粒具有p15A复制子及氯霉素抗性，和具有ColE1复制子及卡那霉素抗性表达载体pET28b相容。SDS—PAGE显示含有pA—GESP质粒的大肠杆菌细胞中3个分子伴侣蛋白的表达水平和含有pR—GESP质粒的大肠杆菌细胞没有明显差异，它们对玉米丝氨酸消旋酶的可溶性表达有部分促进作用，但对N端含有组氨酸标签的玉米铁氧还蛋白还原酶的表达没有作用，在三个含有不同抗生素基因的质粒中共表达分子伴侣、5-氨基乙酰丙酸合酶和尿卟啉原III甲基化酶，两个酶连续催化的荧光产物在细胞内积累量为562．13±3．17／OD600，而没有分子伴侣的积累量为457．66±4．98／OD600，表明分子伴侣改善部分蛋白在大肠杆菌的可溶性表达和催化功能。