IL-1018-57-PE40高效表达、纯化及细胞活性之研究 |
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引用本文: | 彭其胜,李月红,朱平.IL-1018-57-PE40高效表达、纯化及细胞活性之研究[J].生物工程学报,2006,22(1). |
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作者姓名: | 彭其胜 李月红 朱平 |
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作者单位: | 1.吉林大学畜牧兽医学院, 长春 130062; 2.吉林农业大学动物科技学院 长春 130118; 3.军事医学科学院军事兽医研究所, 长春 130062 |
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摘 要: | 以IL-10的功能短肽(40肽,即IL-10第18号至57号氨基酸)为导向部分与PE40(绿脓杆菌外毒素除去受体结合区后的剩余部分)融合分别构建了IL-1018-57-PE40的胞质和胞周质表达质粒,其中,IL-1018-57-PE40在Rosettablue(DE3)中以高效胞质可溶形式表达,在BL21(DE3)pLysS中以胞周质分泌形式表达;表达宿主菌Rosettablue(DE3)超声波破碎后,依次通过硫酸铵盐析、疏水层析、铜离子亲和层析、阴离子交换层析纯化后,得96%重组毒素纯品;细胞活性实验、细胞ELISA和荧光标记实验表明,构建的IL-1018-57-PE40符合免疫毒素的作用机理。因此,该实验为PE免疫毒素的规模制备和纯化做了一定的有益的探索。
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关 键 词: | IL-101857-PE40,纯化,细胞毒性 |
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