| 具有高亲和力和稳定性的人源性抗PD-L1二硫键稳定Diabody的制备 |
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| 引用本文： | 郭娆晴,黄嘉雯,张利刚,赵文丽,辜江涛,邓宁.具有高亲和力和稳定性的人源性抗PD-L1二硫键稳定Diabody的制备[J].中国生物工程杂志,2023(6):20-30. |
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| 作者姓名： | 郭娆晴 黄嘉雯 张利刚 赵文丽 辜江涛 邓宁 |
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| 作者单位： | 暨南大学生命科学技术学院生物系广东省抗体药物与免疫检测工程技术研究中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81972705)资助项目； |
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| 摘 要： | 目的：对天然噬菌体抗体库进行筛选并对抗体进行体外亲和力成熟，获得高亲和力人源性抗PD-L1抗体，然后对该抗体进行二硫键稳定改造，获得具有高亲和力和稳定性的人源性抗PD-L1的二硫键稳定Diabody。方法：首先以PD-L1重组蛋白为抗原在天然噬菌体Fab抗体库中筛选Fab抗体，其次分析结合能力较好的抗PD-L1的Fab抗体可变区基因中的热点，通过对轻链、重链CDR3区的7处热点随机突变构建噬菌体抗体突变库，从中筛选出亲和力得到提高的抗体。最后在抗体骨架区引入两个二硫键，构建二硫键稳定的抗PD-L1的ds-Diabody,并在毕赤酵母GS115中进行表达。结果：该方法筛选获得了6株特异性抗PD-L1噬菌体Fab抗体，对结合能力较好的其中一株抗体CDR3区的热点进行随机突变，成功构建库容为1.14×108 CFU/mL的噬菌体抗体突变库，并从中筛选出亲和力提高约6倍的噬菌体抗体突变株。对该抗体骨架区进行二硫键引入，成功构建与表达二硫键稳定的ds-Diabody。结论：构建的ds-Diabody比Fab抗体与PD-L1结合亲和力高、稳定性好，为药物开发、肿瘤治疗等研究P...
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| 关 键 词： | PD-L1 噬菌体抗体库 抗体亲和力成熟 二硫键稳定双链抗体 |
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