| 人TNF-α双顺反子逆转录病毒载体的构建及其在成纤维细胞中的表达 |
| |
| 引用本文： | 赖冠华,唐展云,陈诗书.人TNF-α双顺反子逆转录病毒载体的构建及其在成纤维细胞中的表达[J].中国生物化学与分子生物学报,1998,14(3):274-279. |
| |
| 作者姓名： | 赖冠华 唐展云 陈诗书 |
| |
| 作者单位： | 上海第二医科大学人类基因治疗研究中心 |
| |
| 摘 要： | 利用脑炎心肌炎病毒的内核糖体进入位点连接人ＴＮＦ－αｃＤＮＡ和选择基因ＮｅｏＲ基因，使ＴＮＦ－α及ＮｅｏＲ基因均受控于病毒ＬＴＲ启动子，将两基因同时转录至同一ｍＲＮＡ，从而构建成人ＴＮＦ－α双顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ／ＴＮＦ－α．在ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ介导下将其导入包装细胞ＰＡ３１７，Ｇ４１８筛选得单克隆，病毒滴度为１０６ＣＦＵ／ｍｌ重组病毒分泌的细胞株．经ＰＣＲ证明外源基因已整合至细胞基因组，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹显示出单一ＬＲＴ转录本．持续Ｇ４１８筛选能明显促进目的基因ＴＮＦ－α的表达．用重组病毒上清感染小鼠成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３，Ｇ４１８筛选获得的混合抗性克隆持续高表达ＴＮＦ－α，４０Ｇｙγ线照射后能维持高效表达至７ｄ．实验结果表明，含ＩＲＥＳ的双顺反子逆转录病毒载体将是一个很好的基因转移载体．
|
| 关 键 词： | 肿瘤坏死因子 内核糖体进入位点 双顺反子逆转录病毒载体 成纤维细胞 |
| 收稿时间： | 1998-06-20 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国生物化学与分子生物学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国生物化学与分子生物学报》下载免费的PDF全文 |
