| 通过原位易错PCR一步构建基因突变文库 |
| |
| 引用本文： | 王未未,张永昌,刘明杰,邵蔚蓝.通过原位易错PCR一步构建基因突变文库[J].微生物学通报,2014,41(4):719-724. |
| |
| 作者姓名： | 王未未 张永昌 刘明杰 邵蔚蓝 |
| |
| 作者单位： | 2. 南京师范大学 生命科学学院 江苏 南京 210046;2. 南京师范大学 生命科学学院 江苏 南京 210046;2. 南京师范大学 生命科学学院 江苏 南京 210046;1. 江苏大学 环境学院 生物质能源研究所 江苏 镇江 212013 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No. 31170027)；江苏高校优势学科建设工程项目(PAPD) |
| |
| 摘 要： | 主要介绍一种通过原位易错PCR构建随机突变文库的新技术。本实验室最近发表的一项国际专利中,利用来源于海栖热孢菌的极耐热性DNA连接酶,在传统PCR循环中加入一个连接步骤,即变性—退火—延伸—连接的四步循环法PCR,从而实现环状质粒的PCR指数扩增(PPCP)。原位易错PCR中所用引物为一段线性双链DNA,它含有与模板质粒不同的筛选标记,产物转化宿主菌后,模板质粒在筛选平板上被直接剔除。筛选到的阳性突变子可用作模板直接进入突变文库的再次构建,通过筛选获得二级或多级累加的正突变。利用这种方法构建了一个木聚糖酶基因和一个纤维素酶基因的随机突变文库,并筛选出具有正向突变的蛋白,证明以PPCP为基础的原位易错PCR技术,为基因定向进化提供了一种快速有效的随机突变文库构建的新方法。
|
| 关 键 词： | 定向进化，随机突变文库，原位易错PCR，环状质粒扩增(PPCP) |
One-step construction of mutagenesis libraries via in situ error-prone PCR |
| |
| WANG Wei-Wei,ZHANG Yong-Chang,LIU Ming-Jie and SHAO Wei-Lan.One-step construction of mutagenesis libraries via in situ error-prone PCR[J].Microbiology,2014,41(4):719-724. |
| |
| Authors: | WANG Wei-Wei ZHANG Yong-Chang LIU Ming-Jie and SHAO Wei-Lan |
| |
| Institution: | 2. College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing, Jiangsu 210046, China;2. College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing, Jiangsu 210046, China;2. College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing, Jiangsu 210046, China;1. Biofuels Institute, School of the Environment, Jiangsu University, Zhenjiang, Jiangsu 212013, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Directed evolution Construction of random mutagenesis libraries In situ error-prone PCR PCR production of circular plasmid (PPCP) |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《微生物学通报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《微生物学通报》下载免费的PDF全文 |
|
