沙门伤寒杆菌内膜蛋白GsiD的表达纯化与相互作用北大核心 |
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引用本文: | 王中山,张梦,夏晓琨.沙门伤寒杆菌内膜蛋白GsiD的表达纯化与相互作用北大核心[J].生物技术,2017(6):533-538. |
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作者姓名: | 王中山 张梦 夏晓琨 |
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作者单位: | 1.徐州医科大学麻醉学重点实验室221004;2.徐州市中心医院东南大学附属医院妇产科221006; |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目("基于β-arrestin2和μ阿片受体相互作用干预吗啡耐受的研究";No.81600969) |
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摘 要: | 目的]克隆沙门伤寒杆菌gsiD编码序列并在大肠杆菌表达菌株Rosetta(DE3)进行过表达,纯化GsiD蛋白质并研究其相互作用关系。方法]使用GFP作为融合蛋白质标签,优化蛋白质表达和纯化过程,使用位于GFP末端的8×His作为标签进行Ni柱纯化。Gsi A、B、C和D之间的相互作用通过细菌双杂交方法进行验证。结果]成功构建gsiD过表达载体,优化了GsiD的表达和纯化条件,每1 L培养基可获得约0.4 mg的GsiD蛋白质;内膜蛋白GsiD能够和内膜蛋白质Gsi C发生相互作用,同时GsiD能够和ATP结合蛋白质Gsi A发生相互作用,却不会和Gsi B发生相互作用。结论]首次克隆并研究了沙门伤寒杆菌gsiD基因,为进一步研究谷胱甘肽转运的机制奠定基础。
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关 键 词: | 谷胱甘肽 膜蛋白 GsiD 谷胱甘肽转运 蛋白质相互作用 |
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