大肠杆菌ybfE基因的三种原核质粒表达水平的对比及蛋白纯化北大核心 |
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引用本文: | 张树军,狄建军.大肠杆菌ybfE基因的三种原核质粒表达水平的对比及蛋白纯化北大核心[J].生物技术,2017(4):337-341. |
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作者姓名: | 张树军 狄建军 |
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作者单位: | 1.内蒙古大学生命科学学院010021;2.内蒙古民族大学生命科学学院028000; |
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摘 要: | 目的]构建大肠杆菌功能未知基因ybf E的pET16b、pET32a和p GEX-4T-1三种原核表达系统,通过对比表达水平筛选出最优表达体系,并纯化表达的可溶性Ybf E融合蛋白。方法]使用pET16b、pET32a和p GEX-4T-1表达质粒构建pET16b-ybf E、pET32a-ybf E和p GEX-4T-1-ybf E原核表达载体,分别转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达Ybf E融合蛋白,对三种表达系统的表达水平进行对比,并对pET16b-ybf E和pGEX-4T-1-ybf E表达体系的裂菌上清中的可溶性Ybf E融合蛋白液分别使用镍柱和GST蛋白纯化柱纯化。结果]构建了pET16b-ybf E、pET32a-ybf E和p GEX-4T-1-ybf E原核表达体系,并使用IPTG诱导表达Ybf E融合蛋白。ybf E在p GEX-4T-1载体内的表达水平最高,接下来依次为pET16b和pET32a。pET16b-ybf E和p GEX-4T-1-ybf E表达的可溶性Ybf E融合蛋白纯化后浓度分别为86μg/m L和724μg/m L。结论]成功构建了ybf E基因的三种原核表达系统,筛选出最佳表达体系,可溶性Ybf E融合蛋白得到纯化。
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关 键 词: | ybf E基因 pET16b质粒 pET32a质粒 pGEX-4T-1质粒 蛋白纯化 |
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