Rab13通过影响PKA活性调节occludin及F-actin在大鼠血睾屏障的分布

目的探讨Rab13-PKA通路对大鼠血睾屏障功能的调节。方法首先构建靶向大鼠Rab13的shRNA载体,通过大鼠睾丸内注射转染Rab13 shRNA,Western印迹检测Rab13体内沉默效果及沉默后BTB相关连接蛋白表达改变,放射自显影检测睾丸组织内PKA活性变化,睾丸组织冰冻切片免疫荧光染色及鬼笔环肽染色分别观察occludin及肌动蛋白丝在生精上皮的分布。结果 Rab13 shRNA睾丸内转染后Rab13表达量与对照shRNA转染相比下降约70%(P0.01),而BTB相关连接蛋白表达无变化;Rab13沉默后PKA活性与对照组相比有明显升高(P0.01);免疫荧光结果表明,Rab13沉默后occludin在VIII期生精上皮的分布显著高于对照组,而在其他期别生精上皮中则无显著变化;鬼笔环肽染色显示Rab13沉默后F-actin在BTB处的分布明显增强;此外,occludin及F-actin的分布变化可被PKA抑制剂H89所拮抗。结论 Rab13可通过影响PKA活性调节大鼠BTB紧密连接蛋白occludin及F-actin的分布,从而参与调节BTB功能。